粟酒裂殖酵母Z15 snoRNA的鉴定及结构与功能分析

运用计算机及实验的方法,在粟酒裂酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）中发现和鉴定了一个新的,结构特殊的ｓｎｏＲＮＡ－Ｚ１５。该ｓｎｏＲＮＡ由一个独立转录的基因编码,位于酵母２号染色体上,Ｚ１５长达９２个核苷酸,属于反义ｓｎｏＲＮＡ家族,它除了具有典型的ｂｏｘＣ／Ｄ结构元素和末端配对区外,还含有分别与酿酒酵母Ｚ１５和Ｚ２相同的两个反义序列,反映了粟酒裂残酵母Ｚ１５ｓｎｏＲＮＡ基     

粟酒裂殖酵母snR41 snoRNA的鉴定及其结构进化的意义

采用计算机分析和分子生物学实验的方法,在粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe中发现和鉴定了一种新的反义snoRNA,命名为snR41,与酿酒酵母Sacharomyces cerevisiae snR41同源分子比较,粟酒裂殖酵母snR41只具有一个指导rRNA核糖甲基化的反义序列,这一发现进一步揭示了反义snoRNA同源分子在一级结构上的多样性,为研究反义SnoRNA结构及进化提供了新的线索。     

同源重组法敲除酵母snoRNA基因的初步探讨

以3个粟酒裂殖酵母核仁小RNA为对象,通过同源重组法构建相应的基因缺失株,并对影响同源重组效率的因素进行分析.结果显示:载体骨架的切除可以显著提高同源重组效率;增加两侧同源片段的长度也能提高同源重组效率;另外,利用粟酒裂殖酵母野生型单倍体菌株进行snoRNA 基因敲除是可行的.     

粟酒裂殖酵母麦芽糖酶基因的克隆及在大肠杆菌内的表达

利用PCR的方法,以粟酒裂殖酵母菌的染色体DNA为模板,扩增得到粟酒裂殖酵母的结构基因,其开放阅读框1740 bp的序列,可以编码579氨基酸,分子量为67.7 kD.利用NCBI对它的蛋白序列进行比对,发现这个蛋白序列与Aspergillus oryza、Candida albicans、Hansenula polymorpha、Saccharomyces cerevisiae、Saccharomyces pastorianus的麦芽糖酶相比分别具有40.6%、41.6%、37.9%、34.7%、34.5%的相似性.而与粟酒裂殖酵母的α-葡萄糖苷酶具有99.8%的相似性,由此可以得出克隆得到的结构基因应该是粟酒裂殖酵母的麦芽糖酶结构基因.将克隆的粟酒裂殖酵母的麦芽糖酶基因克隆到pQE30表达载体中在大肠杆菌中进行诱导表达,然后测定其麦芽糖酶的活力,其酶的比活力是野生菌株的21倍,诱导条件下麦芽糖酶的比活力是非诱导条件下的10倍.     

两个新的粟酒裂殖酵母box H/ACA snoRNA的鉴定、功能分析及进化意义

通过构建粟酒裂殖酵母核小分子RNA的cDNA文库,发现并鉴定了两个新的非编码RNA,分别命名为Sp15-70和Sp18-61.生物信息学分析揭示这两个RNA均具有典型的box H/ACA snoRNA二级结构特征和与rRNA互补的配对区,推测Sp15-70具有指导25S rRNA中U2401和U2298假尿嘧啶修饰的功能;Sp18-61具有指导18S rRNA中U208和25S rRNA中U2341假尿嘧啶修饰的功能.采用CMC-引物延伸法证实:在粟酒裂殖酵母rRNA中,这4个预测位点确实为假尿嘧啶修饰核苷酸.Sp15-70和Sp18-61均由单拷贝基因编码,分别位于粟酒裂殖酵母染色体工和Ⅲ上蛋白质基因的间隔区,在其5'端上游均发现了典型的TATA box元件,表明它们都是独立转录的基因.比较分析这两个snoRNA在不同生物中的功能性同源分子,发现snoRNA基因在进化的过程中发生了广泛的分子重组和转位.     

ubr1基因缺失对粟酒裂殖酵母有丝分裂动力学的影响

为探究粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中ubr1基因缺失后有丝分裂动力学的变化情况,采用荧光蛋白标记和活细胞成像技术分析ubr1基因缺失型(ubr1Δ)菌株和野生型(WT)菌株细胞形态和有丝分裂期的细胞动力学差异.结果显示,ubr1基因缺失后细胞长宽比变小,微管束数目增多,细胞形态出现短棒状和梨形.有丝分裂过程中18.5％的ubr1Δ菌株会错误形成双动粒,且有丝分裂后期纺锤体伸长长度较野生型菌株增加(1.58±0.76)μm,有丝分裂后期持续时间较野生型菌株延长(3.00±1.36)min.有丝分裂末期纺锤体出现鱼钩型和S型断裂,且纺锤体断裂延迟.同时,ubr1Δ菌株与野生型菌株相比肌动蛋白环初始直径增加(1.12±0.19)μm,形成时间延长(3.60±2.85)min,收缩时间延长(4.90±0.21)min,但收缩速度并无明显差异.研究结果可为明确ubr1基因在有丝分裂中的功能及分子机制提供科学依据.     

转录组分析sgf73基因缺失对粟酒裂殖酵母生长代谢影响的分子机制

为研究粟酒裂殖酵母sgf73基因缺失后的关键基因和关键代谢通路,采用RNA-Seq测序技术对野生型酵母菌株及sgf73基因缺陷型菌株进行测序及生物信息学分析,并进行GO和KEGG功能富集分析.结果表明：sgf73基因缺陷型菌株中高表达基因有1 834个,极高表达基因有6个,且有1 714个差异表达基因,包括934个上调基因,780个下调基因;sgf73基因敲除导致细胞代谢和跨膜转运过程异常变化;MAPK信号通路中参与周期调控cki1,cki2和cdc25基因的下调导致sgf73Δ菌株有丝分裂时间延长;调控细胞骨架rgf2,rho1和stt4基因的下调导致sgf73Δ菌株肌动蛋白环收缩异常.     

Ca~(2 )对酿酒酵母与粟酒裂殖酵母细胞增殖的影响

SD培养基中外加不同浓度的Ca2 可促进酿酒酵母与粟酒裂殖酵母细胞的增殖 ,但在促进增殖方式上存在明显差异 .随SD培养基中外Ca2 浓度增加 ,酿酒酵母到达稳定期的细胞终浓度也越高 ;而粟酒裂殖酵母生长到达稳定期细胞终浓度随Ca2 浓度增加而增加的效应不明显 .同时SD培养基中外加Ca2 对酿酒酵母的促进作用主要是通过加快生长对数期细胞分裂速度 ;对粟酒裂殖酵母主要是靠缩短生长延滞期来促进增殖 .     

alg3、vps1301、rad51基因缺失对粟酒裂殖酵母接合生殖的影响

为探寻alg3、vps1301、rad51基因缺失对粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)生长及接合生殖的影响,在25 ℃条件下,培养野生型和3种基因缺失的粟酒裂殖酵母,统计并分析其生长情况;将野生型和3种基因缺失菌株分别各自交配产孢,分析对比野生型和基因缺失菌株的接合生殖情况. 结果显示,生长实验中,25 ℃条件下,12 h内,野生型菌株、alg3Δ菌株、vps1301Δ菌株和rad51Δ菌株的平均生长速度分别为0.042 5 、0.009 8 、0.019 3 、0.036 9 OD₅₉₅/h. 结果提示,粟酒裂殖酵母缺失alg3基因后,其生长速度受影响最大.在细胞接合生殖实验中,3种基因缺失菌株产孢数目都出现异常,其中alg3Δ菌株产孢数与野生型表现出显著差异.同时,alg3基因和vps1301基因缺失后孢子长度与野生型存在极显著差异.结果表明,alg3基因缺失对粟酒裂殖酵母的接合生殖影响最大.综上所述,缺失上述3种基因都对粟酒裂殖酵母的生长和接合生殖有不同程度的影响,其中alg3基因缺失对其影响最严重,其次是vps1301基因,rad51基因对其影响最小.     

粟酒裂殖酵母--一种良好的真核模式生物(Ⅰ)

粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)虽然与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)同属于子囊真菌,但许多研究表明两种酵母在系统分类、细胞周期、rRNA的生物合成和基因的组织、结构及基因的表达调控等方面并不相同,在某些方面粟酒裂殖酵母与高等动物却有一定的相似性,因此,粟酒裂殖酵母也是一种良好的研究真核生物的模式生物.     

The genome sequence of Schizosaccharomyces pombe

We have sequenced and annotated the genome of fission yeast (Schizosaccharomyces pombe), which contains the smallest number of protein-coding genes yet recorded for a eukaryote: 4,824. The centromeres are between 35 and 110 kilobases (kb) and contain related repeats including a highly conserved 1.8-kb element. Regions upstream of genes are longer than in budding yeast (Saccharomyces cerevisiae), possibly reflecting more-extended control regions. Some 43% of the genes contain introns, of which there are 4,730. Fifty genes have significant similarity with human disease genes; half of these are cancer related. We identify highly conserved genes important for eukaryotic cell organization including those required for the cytoskeleton, compartmentation, cell-cycle control, proteolysis, protein phosphorylation and RNA splicing. These genes may have originated with the appearance of eukaryotic life. Few similarly conserved genes that are important for multicellular organization were identified, suggesting that the transition from prokaryotes to eukaryotes required more new genes than did the transition from unicellular to multicellular organization.     

High-frequency transformation of the fission yeast Schizosaccharomyces pombe

The fission yeast, Schizosaccharomyces pombe, has been used extensively for genetic studies but until now it has not been utilized as a host organism for DNA cloning. Here we describe a method for high-frequency transformation fo a leu 1(-) strain of this yeast with hybrid plasmids containing the Saccharomyces cerevisiae LEu 2(+) gene, a bacterial plasmid and either the S. cerevisiae 2 μm plasmid or autonomously replicating sequences (ars)(1) derived from S. pombe DNA. Some of the plasmids contain unique restriction sites which make them suitable for the isolation of S. pombe genes, and they can also be used for the exchange of DNA between S. pombe and S. cerevisiae.     

手术后结合90Sr-90Y敷贴治疗增生性瘢痕及瘢痕疙瘩的疗效观察

目的：探讨^90Sr-^90Y敷贴治疗对增生性瘢痕及瘢痕疙瘩的疗效．方法：对收治的112例瘢痕疙瘩和增生性瘢痕患者，采用^90Sr-^90Y敷贴治疗与手术切除后结合^90Sr-^90Y敷贴综合治疗，均采用多次小剂量法照射，每疗程30-50Gy，一般2～3个疗程．结果：采用单纯敷贴治疗75例患者。治愈48例（占64％），显效18例（占24％），综合治疗组37例患者，治愈33例（占89．2％），显效2例（占5．4％），两组治愈率比较（P〈0．05）。差异有显著性．表明综合治疗治愈率高于单纯敷贴治疗．结论：^90Sr-^90Y敷贴治疗是一种简便有效的治疗方法，尤其是手术后结合敷贴综合治疗疗效更加显著．     

关于症状自评量表合成常模与元分析的讨论

以症状自评量表为工具,以Stata SE12.0和SPSS19.0为主要统计工具,模拟合成量表常模的过程,并进行同质性检验、亚组分析、回归分析和发表偏倚分析。结果表明有4个因子拒绝同质假设,元分析的同质性检验结果拒绝同质性假设,亚组分析和回归分析无法解释其异质性来源,发表偏倚检验结果表明所列文献无发表偏倚。进而得出结论:1.以文献上的二手数据为基础合成的大学生SCL-90常模在统计上极有可能是无效的,从程序上讲也是不可靠的;2.已有的元分析报告中,SCL-90各因子得分与常模比较得出的效应量在统计上是无效的。     

辅酶Q_(10)生产菌株粟酒裂殖酵母原生质体制备和再生研究

研究对辅酶Q10生产菌株粟酒裂殖酵母原生质体制备和再生条件进行了优化,确定了原生质体制备及再生的最佳条件为:茵龄20 h,蜗牛酶浓度2 g/L,酶溶液pH值6.5,酶解温度25℃,酶解时间2 h.通过对粟酒裂殖酵母原生质体制备及再生条件的研究,建立了制备粟酒裂殖酵母原生质体的方法,以期进一步通过原生质体诱变获得辅酶Q10高产菌株.     

Identification and characterization of two novel box H/ACA snoRNAs from Schizosaccharomyces pombe

Ineukaryotes,alargenumberofsmallnucleolar RNAs(snoRNAs)accumulatedwithinthenucleolus playimportantrolesinprecursorribosomalRNA(pre RNA)processingandmaturation[1].AllsnoR NAs,withtheexceptionofRNaseMRP,canbe broadlydividedintotwoexpendinggroups,boxC/D andH/ACAsnoRNAs,basedonconservedsequence elements[2].BoxC/DsnoRNAscontaintwocon servedshortsequencemotifs,boxC(UGAUGA)and boxD(CUGA),locatedonlyafewnucleotidesaway fromthe5′and3′ends,respectively,generallyas partofatypical5′3…     

PE-90坐标与WGS-84坐标转换模型的应用探讨

基于ＰＥ－９０与ＷＧＳ－８４坐标转换模型,以及大地坐标系和空间大地直角坐标系间的变换公式,研究ＧＰＳ和ＧＬＯＮＡＳＳ在中国地区几个代表之处定位时,由于ＰＥ－９０与ＷＧＳ－８４坐标系统的参数不同,而产生的纬差和经差。