水分胁迫诱导表达的小麦基因的cDNA片段克隆和序列分析

以３０％（－１．３１ＭＰａ）ＰＥＧ－６０００对小麦幼苗进行重度水分胁迫处理,利用ｍＲＮＡ差异显示技术分离了水分胁迫诱导表达的小麦基因ｄｉｌｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ,ｄｉ１）的ｃＤＮＡ片段,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析表明,ｄｉ１基因在水分胁迫１０ｈ后表达开始增强并随着水分胁迫时间的延长而增强,水分胁迫４８ｈ时其表达最强。对ｄｉｌ基因的ｃＤＮＡ片段进行了克隆和序列测定（２１１ｂｐ）     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的抑制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子对人类白细胞抗原Ⅱ类分子表达的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到ＣⅡＴＡ基因ｃＤＮＡ５’端片段，构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体ｐｃＤＮＡ－Ⅱ，基因转移ＨＬＡⅡ类分子诱导型表达的ＨｅＬａ细胞，ＩＦＮ－γ诱导，发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降，而ＨＬＡ Ｉ类分子的表达不受影响。实验     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的仰制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子（ＣⅡＴＡ）对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）Ⅱ类分子表达的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到Ｃ Ⅱ ＴＡ基因ｃＤＮＡ ５＇端片段，构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体 ｐｃＤＮＡ－Ⅱ，基因转移 ＨＬＡ Ⅱ类分子诱导型表达的 ＨｅＬａ细胞．经 ＩＦＮ－γ诱导，发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降，而 ＨＬＡⅠ类分子的表达不受影响．实验证明 ＣⅡ ＴＡ反义 ＲＮＡ对 ＨＬＡ Ⅱ类分子表达具有显著的抑制作用，为进一步开展低免疫原性的细胞移植提供了依据．     

利用SSH技术研究小鼠淋巴组织中与束缚应激相关的基因

利用差异表达基因克隆技术减数杂交法,筛选束缚应激诱导小鼠淋巴组织特异表达或高表达基因。获得了应激状态下差异表达的ｃＤＮＡ片段,克隆化后挑选克隆测序。狭窄杂交结果表明Ｌ３６和Ｌ７两个克隆为应激诱导特异高表达的ｃＤＮＡ片段。经ＧｅｎＢａｎｋ检索,Ｌ７克隆只有片段同源序列而无全长同源序列,提示可能来自新基因。用ｏｒｔｈｅｒｎ杂交估算Ｌ３６和Ｌ７的转录基因分别为８００和７００ｂｐ。     

人肝组织中新的C2H2型锌指蛋白编码序列的批量分离与克隆

为了探讨人肝组织中Ｃ２Ｈ２型锌脂蛋白基因的分布数目以及克隆新的锌指蛋白基因,设计了简并ＰＣＲ引物,扩增基因组ＤＮＡ,以其中的２个扩增片段为探针筛选人肝ｃＤＮＡ文库,获得了近百个阳性克隆,对其中的２０个ｃＤＮＡ片段进行了末端测序和同源检索,证明了１５个为新的锌指基因片段。对其中的４个ｃＤＮＡ片段进行了组织表达谱分析,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示：Ｌ５－５为肝,胰脏高度表达;其余为广谱表达。     

基因发现史话

基因组革命 （续上）ＤＮＡ测序技术由于揭示了原先并不了解的基因之间的相互联系而立即震惊世界。两个较早的例子是致癌基因ｓｉｓ和ｅｒｂＢ。一个研究组克隆了这些基因并测定了它们的ＤＮＡ序列。同时，另一个主要从事生化研究的小组分离了两种蛋白质──血小板生长因子（ＰＤＧＦ）和表皮生长因子（ＥＧＦ）──并测定了两者的氨基酸序列。令这两个研究组人员惊讶的是，致癌基因的ＤＮＡ序列与这两种控制生长的蛋白质的氨基酸序列几乎完全一致。这就立刻表明，是致癌基因ｓｉｓ和ｅｒｂＢ使正常细胞转变成癌细胞的。 发现这样的联系还只…     

DPH2L基因在细胞分化/凋亡中的降调节——mRNA差异显示的应用

为鉴定维甲酸诱导的人肺癌细胞分化／凋亡相关基因,采用ｍＲＮＡ差异显示的方法对全反式维甲酸处理前后的人肺腺癌细胞系ＧＬＣ８２的ｍＲＮＡ表达模式进行了分析。６个ｃＤＮＡ片段被分离和克隆。其中１个对就于序列已知而功能未知的ＤＰＨ２Ｌ基因。该基因的２．３ｋｂ全长ｃＤＮＡ最初是从人卵巢癌的关键缺失位点１７ｐ１３．３上分离出来,并被认为是一个候选的肿瘤抑制基因。结果显示ＤＰＨ２Ｌ是一个广泛的基因,除已报道的２     

一种简单有效的检测基因表达产物的方法

外源基因转入动植物细胞后在释译水平上正确表达产物的定性定量测定是基因工程中的重要问题,通常生物中某些酶的含量很低,如异戊烯基转移酶,在进行其转基因研究时较难测定。根据其ｃＤＮＡ序列,预测出抗原位点肽并用固相法合成,与载体蛋白偶联后获得对其起专一性反应的抗体,用该抗体通过ＥＬＩＳＡ法可以有效测定转基因烟草中的基因表达产物。为测定难以分离纯化的低含量的基因表达产物提供了一种简便而有效的方法。     

棉花曲叶病毒外壳蛋白基因启动子不是组织特异表达的启动子

双生病毒是一种单链ＤＮＡ病毒，来自番茄金色花叶病毒（ＴＧＭＶ）的资料表明，其外壳蛋白基因（ｃｐ）启动子在韧皮部特异表达，对新近发现并鉴定的棉花曲叶病毒（ＣＬＣｕＶ）ｃｐ启动子的研究表明，它不是韧皮部特异表达的启动子，该启动子驱动的ｇｕｓ基因表达活笥不仅存在于韧皮部，而且出现在叶肉组织和根尖分生组织中，瞬时表达研究表明，ＡＣ２激活后的ｃｐ启动子在叶肉及叶脉组织均有表达活性。     

水稻减数分裂相关基因OsDMC1的克隆

酵母ＤＭＣ１基因是一个在减数分裂前期 Ｉ表达的减数分裂特异基因，其产物是减数分裂同源染色体配对所必需的．根据在酵母Ｄｍｃ１与拟南芥ＡｔＤｍｃ１中保守的氨基酸ｍｏｔｉｆｓ合成的简并性引物，以ｃＤＮＡ作模板，通过套式ＰＣＲ（ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）和ＲＡＣＥｓ克隆了水稻中酵母ＤＭＣ１的同源基因 ＯｓＤＭＣ１．ＯｓＤＭＣ１全长的 ｃＤＮＡ是 １３４８ ｂｐ，编码 ３４４个氨基酸组成的多肽（ＯｓＤｍｃ１）． ＯｓＤｍｃ１与 Ｄｍｃ１和ＡｔＤｍｃ１的氨基酸序列一致性分别是５１．８％和８１．７％．ＯｓＤＭＣ１在生殖器官中表达量较高，在根中有少量表达，而在叶和幼芽中不表达． Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果表明水稻基因组中有两个拷贝的 ＯｓＤＭＣ１．     

用cDNA阵列鉴定基因表达

采用ｃＤＮＡ文库单克隆ＤＮＡ点膜,与ｍＲＮＡ反转录标记的探针杂交,建立了一种可被广泛应用的系统鉴定基因差异表达的ｃＤＮＡ阵列方法。用此方法鉴定了拟南芥悬浮细胞系,苗及苗对紫外线辐射应答的基因表达模式,通过主要差异表达克隆的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和序列测定分析证实了此方法的有效性和可靠性。     

人脑新EST的分离及其表达特异性分析

为了解离发育和分化的机制，利用差异显著技术从１３和３３周和脑中分离到９０个ＥＳＴ。比较ＧｅｎＢａｎｋ以后发现其中的７４个ＥＳＴ代表新的基因，当中的一些与某些脑发育相关的基因同源。将来自差异显示的７个ＥＳＴ固定在膜上，用来自不同组织的总ｃＤＮＡＲＰＷＳＱＦ ＧＮ ＡＤＷ ＶＳ ＵＱ 进一步鉴定了其在胎儿脑中的差异表达。     

光敏核不育水稻育性相关基因cDNA片段的分离

光敏核不育水稻是我国特有的水稻种质资源,对于按“两系法”途径实现水稻杂种优势育种有着重要意义。采用ｍＲＮＡ差别显示技术,分析了处于不同光周期条件下,光敏感核不育水稻农垦５８Ｓ和常规晚粳品种农垦５８幼穗中基因的表达情况,成功地建立了适合水稻幼穗ｍＲＮＡ差示的优化体系,并筛选获得了５８Ｓ长日处理条件下３条特异表达的ｃＤＮＡ片段经同源比较认为这些ｃＤＮＡ片段可能与幼穗的发育和成熟有关。     

缺铁诱导玉米根cDNA文库的构建及铁胁迫基因(fdr3)的筛选和鉴定

为了分离铁缺乏相关基因，构建了一个滴度为４．５ｘ１０~５ｐｆｕ／μｇ的λＺＡＰ表达型缺铁胁迫玉米根 ｃＤＮＡ文库．通过差异筛选得到 ６个阳性克隆．经 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ验证在缺铁条件下加强表达的有ｆｄｒ３（Ｆｅ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ－ｒｅｌａｔｅｄ） ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｅ。     

春化相关基因ver203F cDNA 3′末端的克隆及序列分析

以差异筛选技术克隆到的春化相关基因ｃＤＮＡ ｖｅｒｃ２０３为基础,设计５’端引物,利用ＲＡＣＥ克隆策略,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增得到ｃＤＮＡ的３‘末端序列ｖｅｒ２０３Ｆ（１１９７ｂｐ）,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析表明其全长约２．０ｋｂ,且其表达具有春化处理的特异性。检索表明该基因序列（ＡＢ０１２１０３）与一大麦茉莉酸诱导基因有部分同源性,推测该基因在调控开花过程中可能参与茉莉酸介质的信号传导途径。     

哺乳动物基因图谱计划

哺乳动物基因图谱（ＭＧＣ）计划是由美国国立卫生研究院（ＮＩＨ）实施的生产全长互补ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）资源的一项新举措。该计划将向整个研究领域公开提供可查询的资源。ＭＧＣ计划承担的任务包括文库的生产、测序和数据库的建立与发展，以及服务于获得一全套人类和其他哺乳动物的全长（开放读框）序列和表达基因的克隆的目标的对文库构建、测序和分析技术的支持。 要识别所有可能的转录的哺乳动物基因组区域还不是一件容易的事。这部分是因为很大一部分ＤＮＡ不编码基因转录本，而且转录的法则和转录本加工的法则尚未完全为人所知。因…     

人类肽-甲硫氨酸亚砜还原酶的cDNA克隆、组织表达谱特征及染色体定位

蛋白质结构中某些氨基酸的氧化和还原是生物体内对蛋白功能的一种调控方式．甲硫氨酸（Ｍｅｔ）被氧化则变为甲硫氨酸亚砜（Ｍｅｔ（Ｏ）），它可导致所在蛋白质的生物学活性降低或丧失，但肽－甲硫氨酸亚砚还原酶（Ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ， ｍｓｒＡ）则可使甲硫氨酸亚砜还原为甲硫氨酸，使其所在蛋白质重新恢复活性．为了研究人体中Ｍｅｔ氧化还原的机制，以牛ｍｓｒＡ ｃＤＮＡ序列为信息探针，筛选人ＥＳＴ数据库，依据若干同源ＥＳＴ的信息从人ｃＤＮＡ分子库中克隆到一个长１２５５ｈｐ的人ＭＳＲＡ ｃＤＮＡ．该ＣＤＮＡ包含一个长７０５ ｂｐ的可读框，它编码了 ２３５个氨基酸残基．同源性比较表明，该基因与牛和大肠杆菌的ｍｓｒＡ基因的氨基酸一致性分别为８８％和６１％．表达谱分析发现，该基因在人体大多数组织中均有一条长约１．６ｋｂ的转录本，并在肾中呈高表达．应用辐射杂种细胞株定位系统（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｈｙｂｒｉｄ ｍａｐｐｉｎｇ ｐａｎｅｌ， ＲＨ ｍａｐｐｉｎｇ）将该基因精确定位在人染色体８ｐ２２～２３区带的ＤＳＳ５１８和Ｄ８５５５０位标之间，由于此前已有Ｋｅｒａｔｏｌｙｔｉｃｗｉｎｔｅｒｅｒｙｔｈ     

PHF2全长cDNA及剪接异构体的克隆鉴定

ＰＨＤ锌指结构蛋白作为ＨＯＸ基因的上游调控因子,在生物体的发育过程中起着重要作用涉及该蛋白的异常还与人类的某些恶性疾病如白血病相关,利用基因数据库同源性比较,ＰＣＲ扩增ｃＤＮＡ文库筛选ｃＤＮＡ及部分基因组ＤＮＡ序列分析,多组织Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交等方法,克隆鉴定了一种新的人类编码ＰＨＤ蛋白的全长ｃＤＮＡ及该基因的不同剪接异构体。     

人神经元电压门控钙通道 γ -3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在４３５ｂｐ中有７５％同源的ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｗ２９０９５）。在该ＥＳＴ中设计引物与ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式ＰＣＲ和ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质ｃＤＮＡ文库和人脑Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得ｃＤＮＡ序列１５４５ｂｐ，其中包含一个９４８ｂｐ的可读框，编码３１５个氨基酸。该可读框经确证命名为ＣＡＣＮＧ３     

水稻低分子量GTP结合蛋白基因osRACD的分离

应用改良的ｍＲＮＡ差别显示技术，从农垦５８Ｓ水稻中，获得了一条与光周期育性转换性状相关的差异表达片段ＲＤＰ－８，同源性比较表明，该片段与玉米低分子量ＧＴＰ结合蛋白基因之间存在着很的序列同源性，进一步应用ＲＤＰ－８片段为探针，筛选长日照光周期处理的水稻农垦５Ｎ幼穗ｃＤＮＡ文库，经ＤＮ序列分析和同源性比较证实，所得的阳性克隆含有水稻低分子量ＧＴＰ幼穗ｃＤＮＡ文库，经ＤＮＡ序列分析和同源性比较证实。所得