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1.
将克隆在不同质粒上的thaumatin基因的两个片段连接起来,连接产物克隆到质粒pUC18上.测序结果表明,连接产物是一个完整的thaumatin cDNA基因.将此基因通过基因重组技术,克隆到植物表达载体pBI121中,构建了一个新的转化植物的表达载体-pBIl21-tha. 相似文献
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根据已知的大麦黄矮病毒GPV株系的外壳蛋白(Coat Protein CP)和移动蛋白(Movement Protein MP)基因序列合成了CP,MP基因的上下游引物,通过PCR扩增获得目的片段,经过Sal I和Rst I酶切、连接、转化、重组质粒的酶切鉴定及基因测序,构建了酵母表达载体pGBKT7-GPV-CP和pGBKT7-GPV-MP,用于在酵母双杂交分析中表达诱饵融合蛋白,为进一步筛选小麦cDNA文库内与大麦黄矮病毒相互作用的寄主因子、克隆寄主因子,推测其种类和功能打下基础。 相似文献
3.
植物甜蛋白thaumatin基因重组表达质粒的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
利用NDA重组技术,将植物甜蛋白thaumatin基因克隆至植物表达载体pBI121中,成功地构建了重组植物表达质粒pBI121-th。 相似文献
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根据已报道的甘薯羽状斑驳病毒(Sweetpotatofeatherymottlevirus,SPFMV)外壳蛋白基因序列,设计合成了一对特异性引物,以我们从国内甘薯品种徐薯-18上分离到的SPFMV的RNA为模板,经过反转录合成cDNA第一条链,经PCR扩增、限制性酶切后克隆于pUC19的Hind 和SacI位点,转化大肠杆菌JM109,经限制性酶切分析、PCR鉴定以及序列分析证实获得了SPFMV中国分离株外壳蛋白基因的全长克隆. 相似文献
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从LCDV1.3kb/pGEX-4T1质粒酶切获得LCDV1.3kb基因片段,构建重组真核表达质粒LCDV1.3kb/pcDNA3.1(+);并将其免疫BALB/c小鼠,用ELISA法检测免疫小鼠血清中抗LCDV抗体和IFN-γ。结果发现免疫小鼠可产生特异性抗LCDV抗体,平均效价为1:40,最高效价达1:320,但小鼠血清IFN-γ平均含量在30pg/mL左右,与阴性对照组无明显差异。结果表明,所构建的重组表达质粒LCDV1.3kb/pcDNA3.1(+)免疫小鼠后可成功诱导其特异性体液免疫应答,但细胞免疫应答不明显,可能与所选载体、免疫动物种类及免疫方法有关,其具体原因有待于进一步探索。此研究为LCDV基因工程疫苗的研制提供了实验资料。 相似文献
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克隆乙肝病毒X基因,并在大肠杆菌中进行表达和纯化。用PCR方法从结乙肝病毒基因组扩增出HBX基因片段,克隆至pMD18-T载体中。序列测定正确后,将其亚克隆到表达载体pProExHTa并在大肠杆菌BL21中表达。表达蛋白经SDS-PAG及Western-blot分析后,亲和层析法纯化蛋白。结果成功克隆了HBX基因,并对其在E.coli中进行了表达。SDS-PAGE及Western blot分析表明表达产物正确。通过IMAC纯化系统获得17 kD纯化蛋白,与文献报道相符。结果成功获得了纯化的HBX蛋白,为进一步研究HBX蛋白与宿主蛋白之间的相互作用奠定基础。 相似文献
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淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段在真核细胞中的初步表达 总被引:5,自引:1,他引:4
将淋巴囊肿病病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)主要衣壳蛋白(Majoy capsid protein,MCP)0.6kb基因片段克隆入真核表达载体pEGFP-N2,得到阳性重组质粒pEGFP-N2-LCDV0.6,用脂质体法将其转染入真核细胞CHO,并进行瞬时表达,荧光显微镜观察及特异性RT-PCR检测结果表明:已成功将目的片断LCDV MCP 0.6kb转染到CHO细胞,并得到了初步表达。此研究为LCDV基因工程疫苗的研制提供了实验资料。 相似文献
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水稻精细胞基因RSSG58启动子的克隆分析及表达载体构建 总被引:2,自引:0,他引:2
根据分布的水稻基因组测序的比较和水稻精细胞优势表达的RSSG58基因cDNA序列,以水稻品种“桂朝2号”黄化苗组DNA为模板,用PCR方法克隆出RSSG58在起始密码子以前的上游调控序列Pr58,经过Pr58启动子进行的鉴定和分析表明,具备大多数高等植物启动子的保守元件,预计它的RSSG58基因在特异表达方面具有一定的作用。为了鉴定RSSG58基因的基本启动子元件,将RSSG58基因5′侧翼序列做缺失片段分析,由PCR从Pr58中得以3个不同大小两端带有HindⅢ,BamHⅠ酶切位点的片段Pr58Ⅰ,Pr58Ⅱ和Pr58Ⅲ,定向插入载体pMGFP4(pBI221改建,报告基因为GFP)中,取代原有的CaMV35S启动子,构建了由驱动报造基因GFP的植物表达载体pRGFPⅠ,pRGFPⅡ和pRGFPⅢ,用于农杆菌介导法水稻遗传转化。其目的是为进一步在模式植物中研究其表达功能奠定基础。 相似文献
10.
纳豆激酶基因重组表达载体的构建及其稳定性 总被引:8,自引:1,他引:7
利用PCR方法从分泌纳豆激酶的纳豆杆菌基因组DN中扩增纳豆激酶基因,将该基因克隆到表达载体PBV220上,筛选重组子,通过限制性内切酶和PCR技术分析,初步确定该重组子所携外源基因为纳豆激酶基因,用凝块溶解时间法(CLT)测出表达产物具有溶解血栓活性,证明该基因可在大肠杆菌中表达,对重组菌中重组质粒的稳定性进行研究,结果表明质粒的插入对宿主菌的生长没有太大影响,该质粒在宿主菌中具有良好的分离稳定性,但结构稳定性较差,SDS-PAGE分析结果表明基因产物为分泌型,蛋白表达量占菌体蛋白的12%左右。 相似文献
11.
乙型肝炎病毒是一种重要的人类病原,乙肝病毒聚合酶在病毒的复制中具有关键作用.拼接了HBV56的聚合酶全长基因,利用重组腺病毒系统,在HEK293细胞中表达乙肝病毒聚合酶.通过一种半定量PCR方法,检测到所表达的蛋白具有逆转录酶活性.这一研究对深入认识该酶结构与功能的关系,研制抑制病毒复制的药物,有一定的意义. 相似文献
12.
探讨一种用于乙型肝炎病毒(HBV)基因组扩增的灵敏度高、广谱性好的巢式聚合酶链式反应(nested PCR)方法,适用于较低病毒拷贝数标本的HBV DNA扩增.通过设计两套通用巢式引物,实现对各基因型(A,B,C,D,E,G)HBV均具有较高的扩增效率;采用两步法分段扩增HBV基因组,对两段目的产物进行测序拼接获得HBV的全基因序列.应用本方法对4组病毒拷贝量(IU/mL)分别为:>1.0×104,1.0×103~1.0×104,2.0×102~1.0×103,<2.0×102的100份血清标本进行全长基因组扩增,其中75份获得阳性结果,各组阳性率依次为:100%,66.7%,60%,25%,有效扩增灵敏度为2.0×102~1.0×103IU/mL;而一步法只在病毒拷贝量>1.0×104IU/mL的标本组中获得15份阳性结果,总的阳性率仅为15%,说明该方法扩增灵敏度明显高于一步法.因此,本方法为HBV流行病学调查研究HBV基因组序列提供了更高的灵敏度,可在流行病学调查中发挥重要作用. 相似文献
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目的构建猕猴B病毒gB和gc合成基因的杆状病毒重组质粒(rBacmid)。方法根据本室已经合成的猕猴B病毒gB基因和gc基因,利用BamHI和XhoI特异性酶切,将其亚克隆于昆虫杆状病毒的pFastBacHTA转座载体。将该阳性转座载体转化到DHlobac感受态细胞,从中筛选出阳性重组细菌,并提取重组质粒。结果获得了重组质粒bacmid—gB和bacmid—gC。结论该研究为猕猴B病毒gB和gc蛋白在杆状病毒系统内的表达奠定了基础。 相似文献
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根据hBLyS (humanBlymphocytestimulator)基因序列设计合成特异性引物 ,用RT_PCR从人外周血淋巴细胞扩增出 85 8bp的hBLyS基因 ,并将其插入到融合蛋白原核表达载体 pGEX_4T_1中 ,得到重组表达质粒pGEX_4T_1/hBLyS。把此重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,经用IPTG诱导 ,表达出了GST_hBLyS融合蛋白。 相似文献
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用CPR技术从纯化的乙型肝炎病毒核酸中扩增出perS2-S基因,并将其定向克隆于真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建成带有完整的乙肝表面前S2抗原基因和S基因的重组质粒。重组质粒经酶切及部分序列分析鉴定后,瞬时转梁小鼠L细胞,ELISA法检测到培养上清液有HBsAg表达。用纯化的重组质粒静脉、肌肉和皮下注射免疫BALB/c小鼠,首次接种质粒DNA3周后,血清抗体开始出现,再次加强2周后,阳性 相似文献
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为验证树Qu对人乙型肝炎病毒(HBV)的易感性,用含HBV的人血清接种给10只成年树Qu(雌雄各半)。然后每周抽血1次,每只动物共抽血11次。用不同公司生产的ELISA试剂检测接种后的动物血清感染指标。实验观察至13周,结果分别有9只和8只动物出现HBsAg阳性,持续最短1周,最长7周。用PCR检测,结果有1只动物连续4周在血清中检测出HBV DNA。表明树Qu能感染人HBV,但实验有待改进以延长感染持续时间。 相似文献
18.
为验证树对人乙型肝炎病毒 (HBV)的易感性 ,用含 HBV的人血清接种给 10只成年树 (雌雄各半 )。然后每周抽血 1次 ,每只动物共抽血 11次。用不同公司生产的 EL ISA试剂检测接种后的动物血清感染指标。实验观察至 13周 ,结果分别有 9只和 7只动物出现 HBs Ag阳性 ,持续最短 1周 ,最长 7周。用 PCR检测 ,结果有 1只动物连续 4周在血清中检测出 HBV DNA。表明树能感染人 HBV,但实验有待改进以延长感染持续时间 相似文献