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李萍萍 《华中师范大学学报(自然科学版)》1993,32(4):0-0
将重组病毒在原代鸡胚细胞上连续传至30代(P30),其结果P30与第11代(P11)一样,在含中性红和X-gal的琼脂糖平板上为蓝色蚀斑;空斑法测定P11至P30,各代病毒滴度均稳定在3×10~7PFU/mL~4×10~7PFU/mL;血凝试验表明。不同代次的血凝滴度基本稳定在相同水平;Western blot检测P30与P11在同一位置出现相同蛋白带;血清中和试验证实传代后的重组病毒抗原活性及保护性稳定。重组病毒经传30代后,在生物学特性和表达水平上都具有良好的遗传稳定性。 相似文献
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采用同源重组的方法,将5aG株狂犬病毒糖蛋白基因插入天坛株痘苗病毒基因组TK区段,置于痘苗病毒晚期启动子P11控制之下,通过筛选,得到一株重组病毒VVaG,实验结果表明:该株病毒可表达5aG株糖蛋白基因,表达产物位于感染细胞膜表面,分子量64×10^3,并可与抗狂犬病毒糖蛋白抗特异组合,用VVaG免疫小鼠,可诱导机体产生抗狂犬病毒中和抗体,抵抗致死剂量狂犬病毒的攻击,中和抗体滴度在免疫后14d达到 相似文献
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重组痘苗病毒对不同哺乳动物细胞株的感染效率及EGFP表达水平研究 总被引:1,自引:1,他引:1
研究重组痘苗病毒对不同哺乳动物细胞的感染效率及表达水平,可为痘苗病毒表达系统宿主细胞的正确选择提供依据.本研究利用重组绿色荧光蛋白基因的痘苗病毒WR—EGFP同时感染不同的哺乳动物细胞株,利用流式细胞仪检测EGFP的表达强度.共使用20种哺乳动物细胞株,其中10种人类组织细胞,2种猴组织细胞。8种小鼠组织细胞.结果表明,重组痘苗病毒wR-EGFP对鼠细胞系BHK21和人细胞系A-549的感染效率和表达效率最佳;整体看,痘苗病毒对多数灵长类动物细胞的感染效率和表达效率优于鼠细胞;对贴壁细胞的感染效率和表达效率明显优于悬浮细胞;但没有特别的组织偏嗜性。 相似文献
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汉滩病毒囊膜糖蛋白g2基因重组腺病毒的构建与表达 总被引:5,自引:1,他引:4
获得汉滩病毒G2 基因 ,构建其重组腺病毒并在HEK2 93细胞中包装表达 ,为研究汉滩病毒基因疫苗提供了实验基础。设计引物采用PCR从含汉滩病毒 \|76 1 1 8株M基因的M5 6质粒扩增出糖蛋白G2 基因片段 ,并将其克隆入腺病毒载体Adeno XviralDNA ,筛选获得重组腺病毒DNA ,转染HEK2 93细胞 ,包装、扩增后得到汉滩病毒G2 基因重组腺病毒原种 ;并在感染细胞内初步表达 ,用ELISA检测表达产物。得到了含汉滩病毒G2 基因的重组腺病毒 ,其滴度约为 1 0 10 pfu/mL ,同时在感染的HEK2 93细胞中检测到汉滩病毒糖蛋白G2 的表达。含汉滩病毒糖蛋白G2 基因重组腺病毒的成功构建 ,为研究汉滩病毒基因疫苗提供了实验基础 相似文献
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以火鸡疱疹病毒(HVT)约8.0kb的BamHI DNA克隆片段中的BamHI HindⅢ亚克隆片段为同源序列,将大肠杆菌β-半乳糖苷酶(LacZ)基因作为报告基因,通过同源重组,获得了表达LacZ基因产物的重组HVT(LacZ-rHVT)。经本内,体外传代表明重组病毒中的LacZ基因表达稳定,同时证明该亚克隆片段属于HVT复制的非必需基因。在此基础上,将I型马立克氏病毒(MDV)糖蛋白B(gB) 相似文献
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本实验利用昆虫杆状病毒表达载体,将果蝇肌动蛋白基因5Cactin克隆入杆状病毒表达载体,以棉铃虫单核衣壳核多角体病毒为亲本病毒,在脂质体介导下共转染棉铃虫细胞,空斑纯化得到重组病毒,以深入研究棉铃虫病毒在入侵、复制及装配过程中,宿主肌动蛋白的动态变化对病毒复制的作用与影响。 相似文献
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目的:构建可溶性白细胞介素6受体(IL-6R)β亚基(sgp130)重组痘苗病毒,感染动物细胞使其表达sgp130,用重组病毒免疫动物产生特异性抗sgp130抗体。方法:将sgp130基因导入痘苗病毒载体pJSA1175,用脂质体转染法将重组载体与野生型痘苗病毒在TK-143细胞中发生同源重组,用BudR和X-gal双重选择,得到带有人sgp130的重组病毒(Vsgp130)。结果:采用IDA和WesternBloting法证实,感染Vsgp130的TK-143细胞上清中有较强的sgp130表达,表达产物分子量为100000左右。用重组病毒免疫家兔和Balb/c小鼠,可刺激抗体产生。结论:sgp130在痘苗病毒载体系统中的表达成功及抗sgp130多克隆抗体的产生为进一步研究IL-6等细胞因子信号传导机理及研制抗sgp130单克隆抗体奠定了基础。 相似文献
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根据冰晶生长速率理论,计算了抗冻糖蛋白(AFGP1-5)溶液中自由生长条件下冰晶生长的激活能,这种定量计算对研究抗冻糖蛋白溶液中冻晶生长习性的有重要意义。 相似文献
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可溶性白细胞介素6受体β亚基在重组痘苗病毒中的表达及其对动物的免疫效果 总被引:1,自引:0,他引:1
构建可溶性白细胞介素6受体β亚基重组痘苗病毒,感染动物细胞使其表达spg130。用重组病毒免疫动物产生特异笥抗spg130抗体。方法:将spg130基因导入痘苗病毒载体pJSA1175,用脂质体转染法将重组载体与野生型痘苗病毒在TK^-143细胞中发生同源重组,用BudR和X-gal双重选择,得到带有人spg130的理组美丽。 相似文献
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将汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白G1重组腺病毒(Adeno-G1)感染VeroE6细胞,用IFA法检测其表达产物;并进一步将其免疫Balb/c小鼠。结果可检测到HTNV糖蛋白G1在VeroE6细胞中表达;用该重组腺病毒免疫小鼠,结果表明免疫小鼠体内可诱导产生抗汉滩病毒G1特异性抗体,同时微量细胞培养中和实验结果表明重组腺病毒还可刺激机体产生低水平的中和抗体,但淋巴细胞增殖反应不明显。说明Adeno-G1免疫小鼠后,主要刺激机体产生特异性的抗HTNV体液免疫应答,但刺激机体产生特异性的细胞免疫应答不明显,为HTNV基因工程疫苗的研究提供了实验基础。 相似文献
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用猪卵透明带55KDa糖蛋白抗原和胞壁酰胺二肽佐剂免疫3只雄性恒河猴,研究猪ZP3免疫的抗生育作用及其对卵巢正常结构与功能的影响,评价用恒河猴作卵透明带生育调节疫苗研究动物模型的合适性。 相似文献
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利用DNA重组技术,将经定点突变改造的绿色荧光蛋白基因(gfp)克隆到植物表达载体pBI-121中,成功地构建了植物重组表达质粒pBI-GFP。 相似文献
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马立克氏病病毒疫苗CV1988株囊膜糖蛋白gI基因的序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
根据马立克氏病病毒(MDV)国际标准株GA株的基因序列设计合成了可扩增gI基因(1060bp)的引物,用PCR技术,以CV1988基因组为模板,扩增得到了预期大小的PCR产物,将此PCR产物和pUC18经同样的限制性内切酶KpnI和BamHI处理后,连接、转化、鉴定,得到了含有gI基因的质粒。将此质粒进行序列分析,比较了它与其他强毒和超强毒株的同源性,用DNAastan软件对其编码的氨基酸的疏水性 相似文献
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目的:构建一种含人乳头瘤病毒(HPV)16型、18型E6/E7融合基因痘苗病毒表达载体.方法:PCR扩增HPV16型、18型E6、E7基因,克隆到pSC-A载体中,通过定点突变方法,分别构建成含E6/E7融合基因的质粒,即pSC-A.HPV16 E6/E7和pSC-A-HPV18 mE6/E7,并将二者连接成载体pSC-A-HPV16 E6/E7-HPV18mE6/E(pSC-T,HPV16 E6/E7-HPV18mE6/E7:T),最后以痘苗病毒表达载体pJ38为转移载体,构建质粒pJ38-HPV16 E6/E7-HPV18mE6/E7(pJ38-T),对所有重组质粒进行酶切鉴定和测序分析.结果:E6/E7融合基因成功克隆到pJ38上.结论:成功构建表达HPV E6/E7融合基因重组痘苗病毒载体,为研制宫颈癌治疗性疫苗奠定基础. 相似文献
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中国对虾(Penaeus chinensis)的白点综合征病毒(WSSV)的提?… 总被引:2,自引:0,他引:2
作者从发生白点综合征的中国对虾中,提取了一株白点综合征病毒,用电镜对纯化的病毒进行了形态学观察,并对病毒纯化过程中蛋白酶抑制剂的使用及离心速度的选择进行了探讨。经蔗糖密度梯度离心,分取各带负染后电镜观察,病毒条带位于40% ̄50%蔗糖梯度之间,其完整毒粒长225 ̄270nm,直径75 ̄88nm,有的完整毒粒带有很长的尾,病毒衣壳长250 ̄320nm,直径60 ̄80nm。在匀浆使用的缓冲液中加入蛋白 相似文献
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人工饲料育家蚕/杆状病毒表达猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因 总被引:6,自引:0,他引:6
以重组病毒Bm-BacPAK6-E2接种全龄人工饲料育及5龄桑叶育家蚕皓月×菁松幼虫、蛹,观察重组病毒的感染发病情况,调查病蚕、蛹的采血量并进行SDS-PAGE分析.结果表明,全龄人工饲料育家蚕接种重组病毒的成功率、采血量等指标均与5龄桑叶育相近,SDS-PAGE蛋白质电泳在家蚕幼虫、蛹血淋巴中均检测到1条与目的蛋白理论分子量(63 kD)相符的特异性蛋白条带,初步认为是重组病毒Bm-BacPAK6-E2的融合表达产物. 相似文献
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含α—乙酰乳酸脱羧酶基因重组酿酒酵母的啤酒发酵 总被引:7,自引:0,他引:7
利用E.coli和酿酒酵母的穿梭质粒pYES2为载体,将寻衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因导入酿酒醇母中,构建了重组质粒pYEA,实现了α-乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达。 相似文献