石见穿萃取物对体外培养成骨细胞活性的影响

石见穿以95%乙醇抽提得总提物.分别用不同试剂萃取总提物,获得其石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物以及其水溶性成分.以体外培养成骨细胞MC3T3-E1为模型,用cck-8法测定细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒法测定了上述不同萃取物对成骨细胞增殖和分化的影响.结果表明:总提物在浓度10～-3、10-4、10-...     

大鼠骨髓基质细胞体外定向诱导成骨

将大鼠骨髓单细胞悬液静置培养36h，利用骨髓基质细胞贴壁能力强的特点对其进行纯化和扩增培养。采用爬片培养、HE染色、组化染色以及碱性磷酸酶活性和钙含量测定等手段研究培养骨髓基质细胞的形态、分化和分泌基质情况。结果表明，非诱导培养条件下骨髓基质细胞呈梭形，部分传代细胞中可观察到脂肪细胞和肌细胞。经成骨性诱导培养后，骨髓基质细胞发生明显的形态学变化，碱性磷酸酶活性上升，钙含量增加，最终形成典型的矿化结节。提示培养大鼠骨髓基质细胞具有分化成脂肪细胞和肌细胞的能力，但其分化成骨的潜能最为强大。本实验诱导骨髓基质细胞分化为成骨细胞的模式有可能适用于骨组织工程研究。     

玉柏石松中甾体化合物对体外培养成骨细胞活性的影响

为研究玉柏石松中甾体化合物豆甾烷-3-酮-21-羧酸（SA）对体外培养小鼠成骨细胞系MC3T3-E1活性的影响,用Alamar Blue法检测了成骨细胞增殖率,碱性磷酸酶试剂盒检测了细胞中碱性磷酸酶活性,茜素红染色检测了成骨细胞矿化水平,荧光定量PCR检测了成骨细胞骨分化相关基因的表达.结果显示：8μmol/L和16μmol/L的SA处理细胞8 d能抑制成骨细胞碱性磷酸活性;处理细胞16 d能提高骨细胞矿化水平.SA抑制成骨早期分化相关基因（Runx-2和Osterix）的表达,促进骨基质蛋白OPN和骨重建相关转录因子（Jun-D,Fra-1和Fra-2）的表达.故SA具有促进骨折愈合的成骨活性,可能通过促进相关转录因子表达,骨折断面旧骨的吸收和骨基质钙化等方式完成.     

玉柏石松中甾体化合物对体外培养成骨细胞活性的影响

为研究玉柏石松中甾体化合物豆甾烷-3-酮-21-羧酸(SA)对体外培养小鼠成骨细胞系MC3T3-E1活性的影响,用Alamar Blue法检测了成骨细胞增殖率,碱性磷酸酶试剂盒检测了细胞中碱性磷酸酶活性,茜素红染色检测了成骨细胞矿化水平,荧光定量PCR检测了成骨细胞骨分化相关基因的表达.结果显示:8μmol/L和16μmol/L的SA处理细胞8 d能抑制成骨细胞碱性磷酸活性;处理细胞16 d能提高骨细胞矿化水平.SA抑制成骨早期分化相关基因(Runx-2和Osterix)的表达,促进骨基质蛋白OPN和骨重建相关转录因子(Jun-D,Fra-1和Fra-2)的表达.故SA具有促进骨折愈合的成骨活性,可能通过促进相关转录因子表达,骨折断面旧骨的吸收和骨基质钙化等方式完成.     

La3+通过重组细胞骨架影响大鼠成骨细胞增殖、分化

研究了稀土离子La3 对体外培养的成骨细胞增殖、分化及细胞骨架的影响,并初步探讨了相关机理.用细胞计数法检测了成骨细胞的增殖.用RT-PCR技术测定了碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、骨桥蛋白(OPN),骨涎蛋白(BSP)以及cbfa-1 mRNA水平.采用激光扫描共聚焦显微镜观察了细胞中F肌动蛋白(F-actin)的变化.结果显示:La3 在48h促进了成骨细胞增殖;在4 d促进了早期分化指标ALP,BSP和cbfa-1 mRNA的表达;在21d促进了晚期分化指标OC和OPN mRNA的表达.与此同时,La3 使成骨细胞骨架发生重组.另外,Western Blot分析证实La3 作用于成骨细胞短时间即可激活粘着斑激酶(FAK)酪氨酸磷酸化.结果提示,La3 通过提高FAK酪氨酸的磷酸化水平,改变细胞骨架的分布和聚合,从而促进成骨细胞的增殖和分化.     

成骨细胞诱导骨髓基质细胞体外成骨的初步研究

目的:探讨在不使用细胞因子或化学药物的情况下,成骨细胞(Osteoblast,OB)与骨髓基质细胞(Bone Marrow Stromal Cells,BMSCs)混合培养时,成骨细胞提供的成骨微环境能否在体外诱导BMSCs向成骨细胞分化,并复合支架形成成熟的骨组织.研究成骨细胞诱导BMSCs有效成骨的最小比值(指成骨细胞与骨髓基质干细胞数量的比值).方法:SY别培养SD乳鼠的成骨细胞与SD大鼠的BMSCs,将成骨细胞和BMSCs以1:9、2:8、3:7、1:0的不同比例进行混合培养,通过测定第3、6、9天培养液上清中的碱性磷酸酶(ALP)的含量,研究成骨细胞促BMSCs有效成骨的最小比值.将两种细胞以该最小浓度比混匀接种于涂附Ⅰ型胶原壳聚糖材料支架上(直径9 mm,高3mm)作为混合培养组,相同终浓度的单纯成骨细胞和单纯BMSCs分别接种于相同支架作为阳性对照及阴性对照.另设置低比值成骨细胞对照组(仅含有共培养组中相同的成骨细胞数,但不含有共培养组中的BMSCs).全部标本均于体外培养8周后取材,通过大体观察、组织学及免疫组织化学等相关检测对新生骨进行评价.结果:成骨细胞和BMSCs以3:7的比例进行混合培养时已可实现有效成骨.3:7比例的混合培养组及阳性对照组(成骨细胞组)体外培养8周后大体观察和苏木素-伊红染色(HE)、ALP染色基本相同,均表达骨特异性细胞外基质Ⅰ型胶原,形成了较成熟的骨组织.阴性对照组(单纯BMSCs组)和低比值成骨细胞组,原细胞支架复合物变小、变形.低比值成骨细胞组在局部形成了少量的骨组织,阴性对照组(单纯BMSCs组)未能发现骨样组织形成.结论:在不使用细胞因子或化学药物的情况下,成骨细胞提供的成骨微环境能够在体外诱导BMSCs向成骨细胞分化并形成成熟的骨组织.混合细胞中成骨细胞与BMSCs的比例为3:7时是有效成骨的最小比值.     

大鼠骨髓基质干细胞分离培养及向成骨、成脂诱导分化的研究

目的利用细胞原代及传代培养技术将大鼠骨髓基质干细胞诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,为其进一步应用奠定基础.方法全骨髓法分离大鼠骨髓基质干细胞,传代后分别在成骨、成脂诱导条件下继续培养,采用碱性磷酸酶染色、茜素红染色及油红"O"染色观察其成骨及成脂分化结果.结果第2代大鼠骨髓基质干细胞成骨诱导9 d后碱性磷酸酶染色呈阳性细胞,连续诱导14 d后可见矿化结节形成,成脂诱导14 d后可见脂肪细胞形成.结论随着诱导条件的不同,大鼠骨髓基质干细胞在体外可定向分化为成骨细胞和脂肪细胞.     

镉对草海湿地沉积物中酸性磷酸酶活性的影响研究

磷酸酶是水解性酶的一种,可以将含磷化合物去磷酸化,水解有机磷的磷酸酯或磷酸酐,在土壤的有机磷矿化过程中发挥重要作用。土壤pH值、土壤磷及重金属含量均会影响酸性磷酸酶活性的大小。目前关于重金属镉对酸性磷酸酶活性影响的研究罕见报道。该研究选取贵州草海湿地沉积物为研究对象,设置4个镉处理水平(0 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg DW)以开展浓度梯度实验,培养不同时间(12 h, 24 h, 36 h, 48 h)来开展时间梯度实验,采用对硝基苯磷酸盐法,研究沉积物中酸性土壤磷酸酶在不同浓度镉水平以及不同培养时间下的响应情况。结果表明,酸性土壤磷酸酶的活性与重金属镉处理浓度间存在显著相关性,随着镉处理浓度的增加,酸性磷酸酶活性逐渐降低;培养时间对镉处理沉积物的酸性磷酸酶活性也有显著影响,随着培养时间的延长,酸性磷酸酶活性逐渐降低。该研究丰富了目前对土壤酸性磷酸酶活性的认识,为进一步理解土壤环境及其对磷酸酶活性的影响提供了理论依据,也对土壤磷素的管理具有指导意义。     

稀土离子对体外培养的成骨细胞增殖、分化和功能表达的影响

采用噻唑蓝(MTT)法、碱性磷酸酯酶比活性的定量测定、细胞周期测定、矿化结节计数、扫描和透射电子显微镜观察等方法研究了不同浓度稀土离子(Ln3 ,包括La3 ,Sm3 ,Dy3 ,Nd3 ,Er3 和Gd3 )对成骨细胞UMR 106增殖、分化和功能表达的影响.结果表明,浓度在1.00×10-4 mol/L时,各稀土离子均表现出抑制成骨细胞增殖的作用. 当浓度降低到1.00×10-9～1.00×10-5 mol/L范围时,则表现出促进作用. 稀土离子(Ln3 )浓度为1.00×10-7及1.00×10-5 mol/L时,显著增强碱性磷酸酯酶比活性(P<0.01). 对其中一个稀土离子La3 作了进一步机理研究,发现极低浓度下(1.00×10-8及1.00×10-9 mol/L)的La3 促进成骨细胞从G0/G1期向S期过渡,并且增强成骨细胞的矿化能力(P<0.001). 扫描电子显微镜和透射电子显微镜结果表明,高浓度(1.00×10-4 mol/L)La3 可使成骨细胞损伤,可见表面变为光滑,微绒毛消失, 细胞膜不完整, 内质网扩张,核膜外凸,核周隙扩张. 低浓度(1.00×10-9 mol/L) La3 对成骨细胞无明显影响. 所得结果提示稀土离子(Ln3 )能够促进体外培养的成骨细胞的增殖、分化和功能表达,呈现出浓度依赖的两面性,并与稀土物种有关.     

La^3＋通过重组细胞骨架影响大鼠成骨细胞增殖、分化

研究了稀土离子La^3＋对体外培养的成骨细胞增殖、分化及细胞骨架的影响,并初步探讨了相关机理．用细胞计数法检测了成骨细胞的增殖．用RT-PCR技术测定了碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）、骨桥蛋白（OPN）,骨涎蛋白（BSP）以及cbfa-1mRNA水平．采用激光扫描共聚焦显微镜观察了细胞中F肌动蛋白（F-actin）的变化．结果显示：La^3＋在48h促进了成骨细胞增殖;在4d促进了早期分化指标ALP,BSP和拍肠-1mRNA的表达;在21d促进了晚期分化指标OC和OPNmRNA的表达．与此同时,La^3＋使成骨细胞骨架发生重组．另外,Western Blot分析证实La^3＋作用于成骨细胞短时间即可激活粘着斑激酶（FAK）酪氨酸磷酸化．结果提示,La^3＋通过提高FAK酪氨酸的磷酸化水平,改变细胞骨架的分布和聚合,从而促进成骨细胞的增殖和分化．     

26-失碳-8-氧代-α-芒柄花萜醇对体外培养成骨细胞活性的影响

为研究玉柏石松提取物26-失碳-8-氧代-α-芒柄花萜醇(26-NO-Ono)对成骨细胞活性的影响,采用MTT检测不同浓度26-NO-Ono(3.33,6.66,13.32,26.64μmol/L)对成骨细胞增殖率,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测成骨细胞内ALP活性,荧光定量PCR检测成骨细胞骨相关基因表达.结果表明:26-NO-Ono给药1d可促进成骨细胞增殖,给药3d可促进成骨细胞ALP活性.26-NO-Ono处理3d和9d会抑制骨涎蛋白(BSP)、I型胶原蛋白(Col-I)以及骨钙素蛋白(OCN)的基因表达;处理6d会促进上述基因的表达.26-NO-Ono长期处理(6d和9d)可以抑制骨桥蛋白(OPN)的基因表达,说明26-NO-Ono对成骨细胞的成骨活性的影响呈时间依赖性,剂量依赖性和细胞分化状态依赖性.     

Cytoskeleton reorganization and FAK phosphorylation are involved in lanthanum(Ⅲ)-promoted proliferation and differentiation in rat osteoblasts

The effect of lanthanum ion(La3+)on osteoblast function and cytoskeleton is assessed in vitro. Osteoblasts were isolated from Snraeuo-tjawiey tetai neonatal rats.Cell proliferation and gene expression levels of cbfa-1,alkaline phosphatase(ALP),osteocalcin(OC),bone sialo-protein(BSP)and osteopontin(OPN)were examined by cell counting and RT-PCR.Cytoskeleton F-actin was stained with rhodamine-con-jugated phalloidin and was visualized by a confocal microscope.As the results,10-8-10-4M La3+-induced osteoblast proliferation on day2.Data from the RT-PCR assay revealed that 10-6 M La3+ up-regulated the expression levels of ALP,BSP,and cbfa-lon day 4,while it enhanced the expressions of OC and OPN on day 21.The F-actin cytoskeleton was strengthened and reorganized under the exposure of La3+.In addition,the phosphorylation of focal adhesion kinase(FAK)was significantly promoted in 24 h evaluated by Western blot analysis.These findings indi-sate that La 3+ promotes osteoblast activity through the phosphorylation of F AK and reorganization of the cytoskeleton.     

PLGA多孔支架降解与成骨细胞相互作用的影响

研究聚丙交酯-乙交酯(PLGA)多孔支架降解和大鼠股骨成骨细胞生理活性之间的相互影响.将大鼠股骨成骨细胞接种于PLGA多孔支架上,观察4周降解时间内成骨细胞增殖活性、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙浓度的变化以及PLGA相对分子质量损失、拉伸性能和压缩性能的变化.实验结果表明,支架降解初期,成骨细胞增殖活性较高,ALP活性和分泌钙的浓度较低;支架降解中后期,细胞增殖速度明显减慢,ALP活性和分泌钙的浓度明显下降.接种有细胞的支架降解过程中相对分子质量减小的速度快于对照组,力学拉伸强度和压缩杨氏模量低于对照组.支架材料中后期降解对细胞产生的影响大于降解初期,细胞附着于支架的生理活动加快了支架降解速度.     

Effects of intermittent negative pressure on osteogenesis in human bone marrow-derived stroma cells

Objective: We investigated the effects of intermittent negative pressure on osteogenesis in human bone marrow-derived stroma cells (BMSCs) in vitro. Methods: BMSCs were isolated from adult marrow donated by a hip osteoarthritis patient with prosthetic replacement and cultured in vitro. The third passage cells were divided into negative pressure treatment group and control group. The treatment group was induced by negative pressure intermittently (pressure: 50 kPa, 30 min/times, and twice daily). The control was cultured in conventional condition. The osteogenesis of BMSCs was examined by phase-contrast microscopy, the determination of alkaline phosphatase (ALP) activities, and the immunohistochemistry of collagen type I. The mRNA expressions of osteoprotegerin (OPG) and osteoprotegerin ligand (OPGL) in BMSCs were analyzed by real-time polymerase chain reaction (PCR). Results: BMSCs showed a typical appearance of osteoblast after 2 weeks of induction by intermittent negative pressure, the activity of ALP increased significantly, and the expression of collagen type I was positive. In the treatment group, the mRNA expression of OPG increased significantly (P<0.05) and the mRNA expression of OPGL decreased significantly (P<0.05) after 2 weeks, compared with the control. Conclusion: Intermittent negative pressure could promote osteogenesis in human BMSCs in vitro.     

HMGB1对心肌成纤维细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白分泌的影响及意义

摘要：目的：通过观察HMGB1（ High mobility group protein-B1）对新生SD（Sprague-Dawley）大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响,探讨HMGB1在心梗后心脏重构过程中的作用。方法：以培养的新生SD（Sprague-Dawley）大鼠CFs为实验对象,分别给予0(对照组)、0.01、0.1、和1 mg/L 浓度的HMGB1进行干预,6、12、18、24和48小时后进行四氮唑盐(MTT)比色法检测CFs增殖水平,采用荧光实时定量PCR法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达。结果：1.与对照组相比,48小时后,不同浓度的HMGB1组新生SD大鼠CFs增殖水平和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平均较对照组有所增高(p<0.05)。2.HMGB1浓度为0.1mg/L时CFs增殖水平和I、Ⅲ型胶原mRNA表达水平较其他处理组均升高(p<0.05)。结论：HMGB1能促进SD大鼠CFs增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达,其作用显示在低水平时可能呈浓度依赖性,并且浓度为0.1mg/L时效应最明显,结果显示HMGB1参与了心梗后的心脏重构过程并发挥了重要作用。     

Effects of genistein, daidzein and glycitein on the osteogenic and adipogenic differentiation of bone marrow stromal cells and on the adipogenic trans-differentiation of osteoblasts

The 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT), alkaline phosphatase (ALP) activity and oil red O assays were used to examine the effects of genistein, daidzein and glycitein on the osteogenic and adipogenic differentiation of primary mouse bone marrow stromal cells (MSCs) and the adipogenic trans-differentiation of primary mouse osteoblasts. The results indicated that daidzein, genistein and glycitein at concentrations from 1×10^-8 mol/L to 1×10^-5 mol/L promoted the proliferation of MSCs and osteoblasts; genistein, daidzein and glycitein promoted osteogenic differentiation and inhibited adipogenic differentiation of MSCs, and inhibited adipocytic transdifferentiation of osteoblasts at appropriate concentrations as 17β-estradiol. It suggests that genistein, daidzein and glycitein regulate a dual differentiational process of MSCs into the osteogenic and adipogenic lineages, and trans-differentiational process of primary osteoblasts into the adipocyte lineages, causing a lineage shift toward osteoblast. Protective effects of them on bone may be mediated by a reversal of adipogenesis which may promote the proliferation, differentiation and mineralization of osteoblasts, and make adipocytes secrete less cytokines which may promote osteoclast formation and activation. In addition, the results also indicated that genistein, daidzein and glycitein may be helpful in preventing the development of steroid induced osteonecrosis.     

银杏叶提取物对大鼠真皮FB增殖及胶原蛋白分泌的影响

原代培养大鼠真皮成纤维细胞（Fibroblast,FB）传代培养后,以不同浓度的银杏叶提取物（EGb761,20、50、100mg／L）对其生长进行干预,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测药物干预后24、48、72h时FB细胞活力变化,碱水解法测定药物干预后3、6d时培养液中羟脯氨酸含量变化,以分别反映EGb761对大鼠真皮FB增殖及胶原蛋白分泌的影响。研究表明EGB761在一定范围内能促进大鼠真皮FB增殖及及胶原蛋白分泌,且呈一定的剂量、时间相关性。