非哺乳动物卵透明带的成熟度和其免疫小白鼠抗生育效应的关系

前言应用卵透明带免疫进行生育控制的研究,近年来取得了较大的进展。不仅发现这一层包被在卵子外层的非细胞性透明带物质,有强的抗原性,而且进一步发现由它诱发的抗透明带的抗血清,有组织特异性,可以阻止体外及体内的精卵结合,起到抗生育效应。其作用原理可能是在卵表面形成抗原抗体免疫复合物,改变了卵透明带的理化特性,这表现在透明带折光性的变化和抵抗蛋白酶的消化作用等方面,从而影响精子在卵表面的粘附,以及干扰精子的穿透,抑制精卵的结合。     

魚卵透明带分离纯化方法及其对小白鼠抗生育效应的比较研究

前言早在1928年前曾有人证实卵组织皮下移殖可以引起不妊,但未引起人们重视。直到五十年代初期perlmann和他的同事对受精卵、精子和胶质的匀浆注射兔子所获得的抗血清的作用进行了广泛的研究,证明其中存在着一系列的抗原抗体反应,指出卵子的皮层具有一系列高度复杂而又与胶膜不同的抗原结构。到六、七十年代由于免疫技术的突破性进展,先后发现这些抗原位于卵的表面、卵泡的内膜和闭锁卵泡之中。1976年国外已报导应用哺乳类透明带作兽用抗生育疫苗专利。近年来,对非哺乳动物中的鱼卵透明带在哺乳类的抗生育效应开展了研究,并初步从透明带中分离提取出有抗生育作用的热溶性蛋白组分。国外对哺乳动物卵透明带的分离提取多用热溶解法,日本有报导应用植物凝集素作亲和层析分离提纯,1980年美国有报导用物理和化学相结合的分离提纯方法。鱼卵透明带的分离纯化方法及其理化性质一直未有报导。     

非哺乳动物精子膜抗原的研究 Ⅱ.鲤鱼精子膜蛋白不同组分对小白鼠抗生育效应的比较研究及其组分Ⅲ的免疫特性

本文比较了鲤鱼精子膜蛋白不同组分对小白鼠的抗生育效应.以抗生育效应良好的组分III的抗血清在体外作精子凝集试验,可观察到其抗血清在体外有凝集精子的作用.将其抗血清与相应抗原作双扩散试验,出现单一沉淀线,而全膜溶液的抗血清与其相应抗原则出现复合沉淀线.组织切片观察受抑孕的小白鼠的卵巢、输卵管等生殖系统组织没有发现异常的病理变化.     

小鼠口服猪卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α的抗生育研究

目的:评价口服卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒诱发的黏膜免疫反应、抗生育作用和对卵巢结构的影响,探讨用黏膜免疫避免卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的可行性.方法:制备pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒,10只昆明系小鼠口服免疫,第3周和第6周分别加强免疫一次,剂量为0.5 mL/只,含pVAX1-pZP3αDNA 50μg;对照组10只雌小鼠口服相同剂量不含pVAX1-pZP3α的壳聚糖.免疫前和免疫后隔周取小鼠血清、阴道冲洗液,用ELISA法检测抗pZP3 IgA和IgG.首次免疫后第12周雌雄合笼交配,统计雌鼠怀孕情况;解剖取出双侧卵巢,制作石蜡切片,光镜观察卵巢病理学变化.结果:免疫组80%小鼠的血清和50%小鼠的阴道冲洗液可检测到抗pZP3 IgA,反应强度与持续时间有明显的个体差异;免疫组5只小鼠未怀孕,对照组全部怀孕,抗生育效果与合笼时抗pZP3 IgA反应有关;免疫组未怀孕小鼠卵巢组织结构与免疫组怀孕小鼠及对照组小鼠无差别.结论:口服pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒免疫小鼠能诱发生殖道黏膜免疫反应,发挥抗生育作用,对卵巢组织结构没有影响.黏膜免疫是克服卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的一种值得深入研究的方法.     

小鼠口服猪卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3a的抗生育研究

目的：评价口服卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3a壳聚糖纳米微粒诱发的黏膜免疫反应、抗生育作用和对卵巢结构的影响，探讨用黏膜免疫避免卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的可行性。方法：制备pVAX1-pzP3a壳聚糖纳米微粒，10只昆明系小鼠口服免疫，第3周和第6周分别加强免疫一次，剂量为O．5ml／只，含pVAXl-PZP3aDNA 50μg；对照组10只雌小鼠口服相同剂量不含pVAX1-pZP3a的壳聚糖。免疫前和免疫后隔周取小鼠血清、阴道冲洗液，用ELIASA法检测抗pzP3 IgA和IgG。首次免疫后第12周雌雄合笼交配，统计雌鼠怀孕情况；解剖取出双侧卵巢，制作石蜡切片，光镜观察卵巢病理学变化。结果：免疫组80％小鼠的血清和50％小鼠的阴道冲洗液可检测到抗pzP3 IgA，反应强度与持续时间有明显的个体差异；免疫组5只小鼠未怀孕，对照组全部怀孕，抗生育效果与合笼时抗pzP3 IgA反应有关；免疫组未怀孕小鼠卵巢组织结构与免疫组怀孕小鼠及对照组小鼠无差别。结论：口服pVAX1-pZP3a壳聚糖纳米微粒免疫小鼠能诱发生殖道黏膜免疫反应，发挥抗生育作用，对卵巢组织结构没有影响。黏膜免疫是克服卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的一种值得深入研究的方法。     

鳙鱼[Aristichthys nobilis(Richardson)]卵透明带的生殖免疫学研究——Ⅰ.受精前后鳙鱼卵透明带超微结构的比较和鳙鱼热溶性卵透明带抗原的定位(SZP)

本研究应用扫描电镜、透射电镜对受精前后鳙鱼卵透明带的超微结构进行了比较,并对鳙鱼热溶性卵透明带抗原在卵透明带上的定位进行了探讨。扫描电镜观察的结果显示鳙鱼卵透明带的表面为筛孔状的结构,整个卵透明带的表面布满直径约0.2μ的微孔。微孔略呈棱格状排列,微孔间的距离约0.8—1。透射电镜观察的结果揭示鳙鱼卵透明带分为外、中、内三层。外层厚约0.3—0.5μ,由颗粒状物质组成。在外层透明带上可见有宽约0.2μ的小裂隙,它是用扫描电镜观察到卵透明带表面的微孔在切片上的表现,裂隙的下端有成团的粗颗粒状物质封闭。外层透明带的外表面有微绒毛样物质复盖。中层透明带较薄,仅约0.1—0.2μ,是由颗粒状物质疏松排列组成。内层透明带最厚,约5—6μ,是由纤细的纤维状物质和颗粒状物质交织而成。其结构呈羽毛状,靠外侧的排列较疏松、靠内侧的排列较致密。受精以后(16—细胞期),卵透明带的表面变相对大皱褶光滑面,筛孔状结构消失,仅留下小量微孔的痕迹。切片上可见透明带各层的厚度相应减薄。其总厚度约比受精前减少一半。外表面的微绒毛样物质消失。内层透明带的结构明显改变。羽毛状结构消失。代之是由粗纤维物质和粗颗粒物质疏松排列组成的结构,并且出现许多不规则的空腔。吸水对照的鳙鱼卵透明带也呈类似的结构改变。但其外层的厚度比受精卵透明带的更薄、内层透明带内侧部的空腔较少,内表面较完整。鳙鱼卵受精后其透明带超微结构的改变主要是由于鱼卵吸水膨胀、透明带物质溶解所致。用扫描电镜观察用抗鳙鱼SZP抗血清或抗鳙鱼SZP—Ⅰ抗血清处理的鳙鱼卵,可见卵透明带表面微孔间区域向外凸出,绒状结构的颗粒变粗大。透射电镜观察可见透明带的外层和内层均有电子致密斑的分布。用对照血清处理的鳙鱼卵的透明带无此现象。用扫描电镜和透射电镜观察加热提取SZP后的鳙鱼卵透明带可见卵透明带的表面结构变模湖,微孔变得不明显,外层透明带明显减薄,内层羽毛状结构消失,纤维状物质断裂溶解,并出现许多空腔。上述结果证明鳙鱼热溶性卵透明带抗原不仅分布在卵透明带的外层,而且还分布在卵透明带的内层。     

香菇纤维素酶组分分离的初步研究

香菇培养物的粗酶制剂,经羟基磷灰石柱阶段洗脱层析可将纤维素酶系分成4个组分,其中组分Ⅰ和Ⅱ均含有β-葡萄糖苷酶和CMC酶,组分Ⅶ和Ⅷ为C_1酶。进一步用羟基磷灰石柱层析组分Ⅱ,可把β-葡萄糖苷醇和CMC酶完全分开,达到电泳纯。组分Ⅰ与组分Ⅶ或Ⅷ之间具有明显的协同作用。酶系的组分在不同生长发育阶段中并无质的差异。     

去糖基猪卵透明带抗原DGZPB和DGZPC的分离纯化及免疫特性

目的：为发展避孕疫苗研究制备去糖基猪卵透明带抗原ＤＧＺＰＢ和ＤＧＺＰＣ并研究它们的免疫反应性。方法：从阉割小母猪采集的猪卵巢分离猪卵透明带,经热溶解,Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－４００和ＨＴＰ柱的分离纯化抗原ＺＰ３,经β－半乳糖苷酶消化,用反相ＨＰＬＣ分离得部分去糖基的ｐＺＰＢ和ｐＺＰＣ,再用ＴＦＭＳ处理,制备去糖基猪卵透明带抗原ＤＧＺＰＢ和ＤＧＺＰＣ。以ＭＤＰ为佐剂,用ＤＧＺＰＢ和ＤＧＺＰＣ分别免疫     

55K猪卵透明带抗原(ZP3)的分离纯化

高分辨双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D－PAGE）研究表明，猪卵透明带是由相对分子质量分别为82000、61000、55000和21000的4个系列蛋白组分组成，其中55000组分含量丰富，是免疫显性的，同时又具有精子受体活性，是研究卵透明带避孕疫苗的重要抗原组分。为深人研究猪卵透明带55K组分的抗生育机制、生化和免疫学特性，本研究建立了一套从猪卵巢分离纯化ZP3组分的方法。猪卵巢于室温解冻后用自制排刀逐一切割，用卵巢处理液（2InlnOUL柠檬酸钠，0．ofmoUryBS，PH7．2）充分泡洗，泡洗液用不同孔径的尼龙网过滤，收集75ap和45mp网上的卵子…     

人卵透明带蛋白3差异表达菌的鉴定及比较

目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况.方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况.结果:保留跨膜区会影响重组蛋白泌出胞外而使表达量降低,潜在酶切位点存在会导致重组蛋白被不完全降解,而多聚组氨酸纯化标签设计位置对表达也有一定影响.结论:从表达量和产物完整性综合考虑,以突变型成熟肽为佳,含跨膜区的蛋白则应选用pPICZaA质粒,以便富集得到完整的表达蛋白.     

鳙鱼[Aristichthys nobilis(Richardson)]卵透明带的生殖免疫学研究——Ⅱ.受精前后鳙鱼卵透明带生化组成及免疫原性的比较

本文应用生化及免疫技术对鳙鱼卵热溶性透明带(SZP)的免疫活性组成及免疫学特征进行研究,并对受精前后鳙鱼卵SZP的生化组分的一些生化组成及免疫原性进行比较。研究结果证明经SephadexG—200柱层析分离得到的鳙鱼卵SZP—1是鳙鱼卵SZP的免疫活性组分,它含有两种分子量相近的蛋白质,其中含量较多的一种蛋白质命名为鳙鱼SZP主要蛋白。应用不同浓度聚丙烯酰胺凝胺电泳法测得其分子量为430,000道尔顿,SDS—PAGE证明它是由四个分子量约100,000道尔顿的亚单位组成。二硫键连结的立体结构是保留鳙鱼卵SZP主要蛋白的免疫原性所必需的。受精以后鳙鱼卵SZP的生化组成和免疫原性均没有改变,鳙鱼卵SZP免疫活性组分和受精过程精卵识别的特异性物质无关。     

抗鱼卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的建立及初步鉴定

详细介绍了抗鱼（花鲢Anstichthysnobilis）卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的制备及鉴定方法，用佛氏佐剂乳化热溶花鲢鱼卵透明带，然后免疫雌性BALB／C小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤Sp2／0融合产生杂交瘤，经3次再克隆后，用间接ELISA方法筛选出一株抗鱼卵透明带的单克隆抗体杂交瘤，经免疫双扩散试验测得该种单克隆抗体为IgG1，经过染色体检查知其染色体数目在86～108之间，为93.6±3.81，杂交瘤细胞染色体经检查发现有中间和亚中着丝点染色体，符合杂交细胞染色体特征。     

受精前后卵透明带糖蛋白的生化特性差异

探讨受精后卵透明带糖蛋白的生化特性变化．用SDS-PAGE分析未受精卵和2-细胞胚胎的透明带成分的差异．研究结果表明，受精前后卵透明带的主要带型相似，但2-细胞胚胎透明带在还原电泳中有一条特异的小肽，分子质量在15000～30000之间，约为22000．进一步用HPLC分析两种样品的O-侧糖链的不同，分析显示，两种样品的O-糖链中有3种单糖基的保留时间值很相似，但有些寡糖基明显不同．小鼠透明带精子受体失活的分子机制主要在于O-寡糖链的修饰，O-单糖与精子受体失活没有明显的关系。     

不孕妇女血清中卵透明带抗体的检测

利用与人卵透明带有交叉免疫反应的猪ZP3抗原，建立起不孕妇女血清卵透明带抗体检测的ELISA技术，并对120例不孕妇女血清进行了检测，发现15例透明带抗体阳性血清。该法灵敏、特异，稳定性和重复性好，易于在临床推广应用。     

用猪卵透明带55KDa糖蛋白抗原（ZP3）免疫恒河猴的初步研究

用猪卵透明带５５ＫＤａ糖蛋白抗原（ＺＰ３）和胞壁酰肢二肽佐剂（ＭＤＰ）免疫３只雌性恒河猴，研究猪ＺＰ３免疫的抗生育作用及其对卵巢正常结构与功能的影响，评价用恒河猴作卵透明带生育调节疫苗研究动物模型的合适性。实验观察持续４４０天，三只免疫猴中，两只产生高滴度抗ＺＰ３抗体并导致不孕（免疫组怀孕率为３３％，对照组为８０％）．血清Ｅ＿２和Ｐ测定结果表明，抗体滴度高的两只猴Ｅ＿２和Ｐ的水平极低，且不呈周期性变化，组织学观察表明两只不孕猴的卵巢缺乏生长卵泡和成熟卵泡，揭示ＺＰ３免疫阻断了卵泡的发育，这些结果与用猪ＺＰ３免疫其它灵长类动物报导的相似，它进一步证实ＺＰ３免疫的抗生育作用，并支持用恒河猴作动物模型，研究用合成肽段或基因重组产物作免疫原的卵透明带生育调节疫苗。     

非哺乳动物精子膜抗原的研究 Ⅰ.鲤鱼精子膜蛋白组分Ⅲ的分离纯化及其理化性质的研究

本文用离子型去垢剂脱氧胆酸钠溶解鲤鱼精子膜蛋白,制备性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳进行分离,电泳洗脱结合葡聚糖凝胶柱层析纯化,得到对小白鼠具有良好抗生育效果的鲤鱼精子膜蛋白组分III,并对其理化性质进行了研究.     

海胆卵内生菌分离及其生物活性的初步探讨

海胆卵中含有丰富的唾液酸聚糖蛋白,作者从共生的理论出发,采用涂布法两次从海胆卵内共分离到83株菌,通过形态学的方法初步鉴定大部分为细菌.采用液体发酵法进行发酵,83株菌的发酵液均对唾液酸的特征显色反应呈阳性,唾液酸含量测定表明有1株菌唾液酸的含量达到5.8 μg/mL,有7.23%的菌株唾液酸含量达到或接近3 μg/mL.通过对其抗菌、抗氧化和抗肿瘤等生物活性测定表明,有8株菌具有不同程度的抗菌活性,占被检测菌株总数的19.05%;有2株菌对肺癌细胞具有明显的抑制作用.上述结果表明海洋动物海胆中含有丰富的菌种资源,具备开发生物活性物质的潜力.     

鱼卵透明带的电镜观察和免疫反应后透明带超微结构的变化

前言卵透明带是卵母细胞周围的一层非细胞性结构,是受精过程初期精子必须粘附和穿透的一层结构,它的成分主要是糖旦白.不少学者认为精卵的结合包括了与透明带的结合,这种结合,据Gwatkin等人的看法,可能与特异的精子受体部位结合,至于受精过程中阻止多个精子的进入,也可能与"透明带反应"有着密切的关系,因此看来卵透明带是受精过程初期的一个很关键的部位.     

金黄地鼠卵冷冻保存的初步研究

人精子一去透明带地鼠卵穿透试验（HOPT）在国内外广泛应用于评价人精子的生育潜力,但实施检测尚存在实验周期长,动物超排获得卵子往往难与精子完成制备的时间相一致等问题。为此,应用冷冻保存的金黄地鼠卵可以克服这些不足。本研究应用程序控制生物冷冻仪,探讨金黄地鼠冷冻保存的可行性。冷冻保护剂为二甲基亚砜（DMSO）,降温冷冻为5步程序。卵子解冻后用渗透压递减洗涤脱除DMSO。冷冻保存卵采用卵子形态学和精子穿卵率评价。结果表明,冷冻保存后约47％的卵子保持近似对照组的形态,53％的卵子表现出细胞结构损伤或异常。与对照…