两株松材线虫拮抗细菌的筛选和鉴定

【目的】筛选对松材线虫具有较高杀线活性的拮抗细菌。【方法】以分离自南京、洛阳、上海的松树茎部的137株内生细菌为研究对象,采用培养滤液和菌悬液浸渍法对这些菌株进行杀线活性的测定,并对筛选的高效拮抗细菌进行菌种鉴定。【结果】通过培养滤液浸渍试验筛选出3株细菌对松材线虫有较高的杀线活性,使用3种菌滤液处理线虫48 h后,线虫死亡率均达到100%,其中菌株LYMC-3的培养滤液还可使线虫虫体出现消解。将3株菌的培养滤液分别稀释2倍、4倍和10倍后处理松材线虫,随稀释倍数的增加,培养滤液的杀线活性逐渐降低。处理线虫48 h后,菌株LYMC-3的10倍稀释滤液与其他两株菌滤液相比对线虫的致死率最高,为94.7%; 在菌悬液浸渍试验中筛选出菌株NJSZ-13对松材线虫有较高杀线活性,10⁵ cfu/mL 浓度的菌悬液处理线虫48 h后,线虫死亡率达81.5%。通过对LYMC-3和NJSZ-13菌株的形态特征、生理生化特征、Biolog鉴定和16S rDNA序列以及系统发育分析,确定菌株LYMC-3、NJSZ-13分别为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。【结论】从松树体内筛选到两株对松材线虫有高效拮抗活性的菌株LYMC-3和NJSZ-13,对生物防治松材线虫病具有潜在的应用价值。     

一株抗黄芪根腐病芽孢杆菌的筛选、鉴定及抑菌物质的初步研究

从河西走廊敦煌盐碱土中分离筛选出有效拮抗黄芪根腐病病原菌尖孢镰刀菌的细菌,以期能为黄芪根腐病的生物防治提供菌种资源.采用平板对峙法和琼脂扩散法筛选拮抗菌,通过其形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列进行分类学鉴定;对其产抑菌物质的发酵条件进行优化,探讨其抑菌谱与稳定性;用有机溶剂进行抑菌物质的初步提取和抑菌效果的测定.结果表明,从20株细菌中,初筛获得了抑菌率高于50%的5株细菌,经过复筛得到抑菌圈直径达到3.78 cm的菌株7-2-3-4,其对包括尖孢镰刀菌在内的多种植物病原真菌均有较好的拮抗效果,经鉴定菌株7-2-3-4为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其最优发酵条件为:发酵培养基为LB培养基、装液量100 mL每250 mL、接种量5%、初始pH 7、发酵时间15 h.菌株7-2-3-4在温度-20～121℃、pH 2～12、紫外照射时间0～60 min处理下均表现出较好的稳定性,选择不同的有机溶剂处理无菌发酵液,甲醇粗提物抑菌效果最好,抑菌物质初步鉴定为脂肽类.     

拮抗梨黑斑病菌的链霉菌的筛选及鉴定

从河北梨树果园土壤中分离到一株对梨黑斑病菌(Alternaria alternard)有强拮抗作用的链霉菌菌株B-105,该菌对多种植物病原真菌有很好的抑制作用.离体叶片和鸭梨果实试验表明,B-105菌株对梨黑斑病防治效果显著.通过对拮抗菌的形态特征、培养性状、生理生化特征及16S rDNA序列进行综合试验分析.鉴定该菌株为灰色链霉菌(sfreptomyces griseus).     

一株当归根腐病拮抗菌株的筛选、鉴定及培养条件优化

本研究从河西走廊盐碱土中分离得到的多株对植物病原菌具有拮抗活性的细菌菌株中,筛选当归根腐病拮抗菌株,为当归根腐病的生物防治提供适合的菌种资源.采用平板对峙、琼脂扩散法筛选拮抗细菌,通过形态学、生理生化试验及分子生物学鉴定法确定菌株分类学地位;以活性物质稳定性试验为基础,设计单因素试验,响应面分析法优化培养条件.结果表明:菌株A17-2-1具有较好的当归根腐病拮抗活性,且抗菌谱较广,经鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis);其活性物质在高温、强碱及紫外照射下均具有较好的稳定性;最优培养条件为p H8.5、温度32℃、氯化钠含量0.5%,在此条件下培养24 h,菌株A17-2-1菌悬液在波长600 nm处吸光度值为1.360,且在该条件下对两株当归根腐病病原菌的抑菌率均达到81.01%以上.     

一株具有广谱抑菌活性的兵马俑芽孢杆菌HS-15的筛选及其抑菌活性研究

采用高浓度土壤菌悬液涂平板法筛选出45株具有抑菌活性的菌株;以其中一株具有较强抑菌活性的菌株为研究对象,通过细胞形态特征、生理生化实验及16S rDNA序列分析等方法,将其鉴定为兵马俑芽孢杆菌,并命名为Bacillus bingmayongensis HS-15;分别用点植法和平板对峙法检测HS-15对细菌和真菌的抑菌活性,结果发现,该菌株对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌都有较强的抑制作用,是一株广谱微生物拮抗菌;发酵条件优化结果表明,28 ℃发酵20 h时,发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强;经透析袋处理,抑菌活性没有变化,而胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性丧失,初步推测抑菌物质为蛋白质类.本研究丰富了产抑菌活性物质微生物菌种资源库,为天然防腐剂的开发提供理论基础.     

宫廷奶酪中优良乳酸菌菌株的分离与鉴定

利用梯度稀释法和划线纯化法对4种宫廷奶酪中的乳酸菌进行初筛,再通过产酸实验和过氧化氢酶实验进行复筛,得到4株乳酸菌。通过形态学特征观察和16S rDNA序列分子鉴定,确定2株为屎肠球菌(MRSA1、MRSB1),2株为乳明串珠菌(MRSA2、MRSD3)。抑菌实验表明乳明串珠菌MRSA2对大肠杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌具有良好的抑菌特性；4株菌均有抗氧化活性,菌悬液的DPPH自由基清除能力和羟自由基清除能力均高于无细胞提取物,其中菌株MRSA2菌悬液DPPH自由基和羟自由基清除能力分别高达60.67%和31.86%。研究筛选出的具有良好抑菌特性和抗氧化活性的乳明串珠菌MRSA2在功能性食品研发中具有潜在的应用价值。     

辣椒疫霉菌拮抗细菌的筛选、鉴定及防效测定

从天津、河北、山东、山西、福建、河南及江苏等地蔬菜根际土壤中分离细菌1万余株,从中筛选出对辣椒疫霉菌Phytophthora capsici有明显拮抗作用的细菌802株,进一步用立枯丝核菌Rhizoctonia solani、番茄灰霉菌Botrytis cinerea及瓜果腐霉菌Pythium aphanidermatum为靶标筛选出对以上病原真菌有较好拮抗作用的菌株62株。对辣椒疫病防效温室盆栽实验结果表明,6个菌株防效在70%以上,其中菌株TB1340防效最高,达到82%。菌株TB1340生物学特性测定结果表明其具有较强的产生几丁质酶、纤维素酶和β-1,3-葡聚糖酶活性。经16S rRNA基因序列分子鉴定结合形态学观察,菌株TB1340被初步鉴定为芽孢杆菌Bacillus sp.。     

烟草赤星病菌拮抗菌的筛选鉴定及发酵液稳定性分析

为了探寻烟草赤星病的生防药剂,减少该病害对烟草生产的影响,利用琼脂块法和管碟法从土壤中筛选烟草赤星病拮抗菌,并进行鉴定,考察其抗菌谱和发酵稳定性.结果表明:成功筛选得到一株拮抗菌株ZJNU968,其对烟草赤星病菌的抑菌圈直径达到了3.60 cm;根据菌株形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析结果,鉴定该菌株为Streptomyces lunalinharesii;ZJNU968菌株对杨树溃疡病菌、水稻白叶枯病菌、番茄早疫病菌、小麦赤霉病菌和黄瓜枯萎病菌等均有较强的拮抗作用,同时,发酵液中抗菌活性物质具有较强的热稳定性、酸碱稳定性和光照稳定性.因此,ZJNU968菌株产生的代谢产物有望开发成为一种新型防治烟草赤星病菌的生物农药.     

一株铜绿假单胞菌的分离鉴定及其对VPAHPND拮抗效果的评价

近年来，急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND)造成了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖业巨大的经济损失，其病原为一类含有致病基因PirAB的弧菌(Vibrio),主要为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP_AHPND).本研究以VP_AHPND为受试菌株，从江苏海域捕获的黄姑鱼(Nibea albiflora)体内分离筛选对VP_AHPND具有抑制作用的拮抗菌株.通过形态学、生理生化及分子生物学方法进行鉴定，研究了其拮抗效果、拮抗活性物质，并对生物安全性和被动保护效果进行评估.结果表明，分离筛选出1株具有良好拮抗效果的菌株JSHY97,经鉴定该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa).该菌株对3株具有不同分型的VP_AHPND均具有良好的拮抗效果，其抑菌圈直径达19.25 mm～21.80 mm,初步判断其活性物质来源于胞外产物.口服JSHY97的凡纳滨对虾...     

黄瓜灰霉病拮抗菌的筛选鉴定及其抑菌特性研究

从石家庄地区多个蔬菜大棚的根际土壤分离筛选到一株高效生防菌F1-2,对黄瓜灰霉病菌的抑菌圈直径高达33mm。根据菌株F1-2的形态特征、生理生化特性以及16SrDNA序列对其进行鉴定,初步确定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。采用生长速率法对拮抗菌的抑菌谱进行测定,其对所选的16种病原菌均有很好的抑制作用。实验还对拮抗菌F1-2的抑菌特性进行了研究,菌株连续传代至10代抑菌性能保持不变,菌株的发酵液对热和酸碱都比较稳定。该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有开发成为灰霉病生防制剂的潜力。     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)TH2菌株抗菌物质对植物病原菌的抑制作用

作者从福建各地不同作物根围和根际土壤中筛选出拮抗茄科青枯病一些菌株,其中有一芽孢杆菌的强拮抗菌株(TH2),研究认为该菌株不仅对茄科的青枯病病菌有抑制作用,而且对Xanthomonas camperctris.及Erwina carotovora的病原细菌和Peronospora parasitica的病原真菌都有抑制作用,抑菌谱广.田间小区试验证明TH2菌滤液可以防治姜瘟病、白菜软腐病、花椰菜黑腐病等.     

具抑菌活性海星内生细菌的筛选及初步研究

从海星的胃、幽门盲囊和生殖腺内共分离到16株菌株.抑菌实验表明,获得的内生细菌中44%的菌株可拮抗至少一株指示菌,各菌株对不同指示菌的拮抗效果差异较大.其中抑菌能力较强的W2#菌株抑菌谱较广,且对大肠埃希氏菌(Escherichia coli)拮抗作用明显,具有较大研究价值,该菌株分布于海星胃及、幽门盲囊中,但在生殖腺内没有发现.经初步鉴定,W2#拮抗菌株为黄色杆菌属(Xanthobacter Wiegel et al.,1978)细菌,实验表明W2#细菌在30℃、pH 8.0环境下生长较好,在25℃条件下发酵液抑菌活性最高.     

拮抗灰霉病菌的低温型木霉菌株的分离鉴定

木霉是一种具有良好生防潜力和应用前景的灰霉病防治菌，但是目前的木霉菌株大多是在常温条件下筛选获得，造成其对冬季低温条件下发生的灰霉病防治效果较差.筛选鉴定耐低温且拮抗效率高的木霉菌株对低温地区灰霉病的防治具有十分重要的意义.采集冷凉地区的土壤样品，利用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)在16℃低温条件下分离培养木霉，共获得88株具有良好低温适应性的木霉菌株；利用平板对峙法对这些木霉菌株在低温条件下拮抗灰霉病菌的效率进行了研究，获得3株高效拮抗灰霉病菌的木霉菌株J4-1,J4-5,C2-7;经分子生物学与形态学相结合的方法鉴定，J4-1为棘孢木霉(Trichoderma asperellum),J4-5为非洲哈茨木霉(Trichoderma afroharzianum),C2-7为拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis).获得的低温环境下高效拮抗灰霉病菌的木霉菌株将为北方冷凉地区植物灰霉病的防治工作奠定基础.     

茶树炭疽病拮抗内生细菌贝莱斯芽胞杆菌的筛选与鉴定

从祥云茶业基地信阳10号母本园中采摘信阳10号茶树(Camellia sinensis)健康叶片,分离纯化得到茶树内生细菌7株,平板对峙法筛选得到4株拮抗菌,均对茶树炭疽菌(Colletotrichum fructicola)具有抑制作用,其中X10-03抑菌效果最好,其代谢产物对茶树炭疽病病菌的抑菌率达到52.7%.光学显微镜观察发现,X10-03菌株代谢产物可有效抑制茶树炭疽菌分生孢子萌发和菌丝的生长.稀释3倍的发酵液对茶树炭疽菌菌丝生长的抑菌率达到70.4%;经过16SrDNA和gyrA基因序列分析,将内生拮抗细菌X10-03鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis).     

16S rRNA测序在细菌鉴定中的应用

对分离获得的一株细菌P29,经聚合酶链式反应扩增后测定该菌株的16S rRNA基因序列,由16S rRNA基因序列比较可知,菌株P29与肠杆菌属和泛菌属亲缘关系最为接近,16S rRNA基因相似性达到99%.结合生理生化实验结果综合分析后,将其鉴定为泛菌属的成团泛菌.     

黄栌枯萎病菌拮抗细菌的分离与鉴定

为了获得能有效拮抗黄栌枯萎病的大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的生防菌株,采用系列稀释分离法和平板对峙法从盐碱地土壤中筛选拮抗细菌,基于形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定菌株,并测定其无菌滤液和挥发性气体的抑菌活性。筛选结果表明,菌株C-2-3-2是一株能有效抑制黄栌枯萎病菌和尖孢镰刀菌的生防菌株,经鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该菌株的无菌滤液对黄栌枯萎病菌和尖孢镰刀菌均具有明显的体外抑菌作用,且能有效抑制黄栌枯萎病菌微菌核的形成。同时,其挥发性气体也能有效抑制黄栌枯萎病菌的生长。另外,研究还发现该菌株能产生铁载体和合成氨,并产生几丁质酶、纤维素酶、蛋白酶和β-1,3-葡聚糖酶。研究结果表明菌株C-2-3-2在黄栌枯萎病生物防治中具有较好的应用潜力和较高的研究价值。     

强抗锌鞘氨醇单胞菌的分离鉴定及其抗性机理

从江西德兴铜矿重金属污染土壤中筛选得到一株对重金属锌具有极强抗性的菌株,命名为DX-T3-03.对该菌株进行形态和生理生化实验,并结合16SrDNA序列分析,鉴定其归属为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas sp.).该菌对Zn2+的抗性高达3600mg/L,具有很高的应用价值.通过红外光谱和SEM-EDX(Scanning Electron Microscope-Energy Dispersive X-ray spectrometry)分析对其吸附机理做了初步探索,结果表明:DX-T3-03的细胞壁上参与积累作用的化学官能团主要有-OH,-NH,-COOH,-PO3-4等;高浓度锌在细菌细胞表面形成沉淀而达到对锌的富集与解毒.     

凤丹根腐病拮抗放线菌的分离筛选及鉴定

为获得凤丹根腐病拮抗放线菌,丰富凤丹根际放线菌资源,采用稀释涂布平板法对1~5年生凤丹根际放线菌进行分离纯化,平板对峙法及抑制菌丝生长速率法进行拮抗菌筛选,并通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析进行菌株鉴定。经分离纯化,得到83株凤丹根际土壤放线菌,有15株具有拮抗凤丹根腐病菌作用,抑菌直径大于15mm的放线菌有4株,其中菌株NL_(4-2)10~(-4)6抑菌直径达19. 67mm,发酵液抑菌率最大为84. 38%,抑菌效果最佳,鉴定为Streptomyces tauricus(公牛链霉菌),该菌株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠球菌的抑菌直径分别为11. 50mm、13. 67mm、15. 17mm。凤丹根际拮抗根腐病放线菌资源丰富,NL_(4-2)10~(-4)6具有广谱抑菌性,对凤丹根腐病具有良好的生物防治和开发应用潜力。     

一株产抗菌物质链霉菌的筛选及鉴定

从土壤中分离到一株对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)有较强拮抗作用的链霉菌菌株HCCB10124,研究其拮抗性表明,对10种常见的病原真菌和部分细菌有拮抗作用,但对植物病原性真菌的抑制效果高于细菌.其形态特征、培养特性、生理生化特性、细胞壁组分与链霉菌属中的白网链霉菌(Streptomyces albireticuli)相同,16S rDNA序列的同源性达99%.根据多项分类原则和系统进化树的构建分析,将该菌株初步归属于白网链霉菌.     

察尔汗盐湖嗜盐菌CEH-ST79对马铃薯干腐病的抑制活性及鉴定

为了进一步明确察尔汗盐湖嗜盐菌CEH-ST79对马铃薯干腐病的生防效果,以3株马铃薯干腐病病原菌为指示菌,分别采用平板对峙培养法、牛津杯法和马铃薯活体实验测定嗜盐菌菌株CEH-ST79、发酵液及其提取物对马铃薯干腐病的体外及活体抑制活性。结果表明:菌株CEH-ST79对3株马铃薯干腐病病原菌具有强抑制活性,抑菌带宽为0. 19～0. 33 cm;其发酵液提取物具有较强抑制活性,抑菌带宽为0. 41～0. 70 cm;菌株CEH-ST79发酵液对病原真菌65B-2-6的抑制活性最高,抑制率为73. 83%;菌株CEH-ST79发酵液的乙酸乙酯提取物对病原真菌65B-2-6的抑制活性最高,抑制率为81. 04%。通过形态学、生理生化特征及分子生物学鉴定,确定菌株CEH-ST79为简单芽孢杆菌Bacillus simplex。本研究表明菌株CEH-ST79是一株对马铃薯干腐病具有强抑制活性的嗜盐菌,可进一步将其开发为生防杀菌剂。