甜菜M14品系特异表达基因BvM14-MADSbox启动子的克隆及序列分析

甜菜M14品系是带有白花甜菜染色体的栽培甜菜单体附加系,其染色体组成中除了包含18条栽培甜菜染色体外,还附加有白花甜菜第9号染色体,具有无融合生殖特性,无融合生殖能够固定杂种优势.在前期工作中,通过SSH、RACE等技术获得了甜菜M14品系特异表达基因BvM14-MADSbox的eDNA全长.通过6种限制性内切酶分别酶切M14品系基因组总DNA,再与相应接头连接,构建了6个DNA步移文库.根据基因BvM14-MADSbox cDNA序列设计引物,通过染色体步移技术克隆出该基因的上游DNA序列.经生物信息学分析,推测获得了BvM14-MADSbox基因上游1 718 bp的启动子序列,该序列含有启动子的基本元件TATA-box、CCAAT-box,和ARE、ERE、HSE、ABRE、CGTCA-motif等重要的顺式调控元件及一些光反应相关元件.该结果为今后BvM14-MADSbox基因的时空特异性表达调控机制奠定基础.     

甜菜(Beta vulgaris)染色体苏木精(Hematoxylin)分化染色

<正> 研究甜菜核型,从形态特征上鉴别每对染色体,是甜菜遗传学和育种实践的重大课题。但甜菜与大多数重要的经济作物不同,染色体在形态、大小、着丝点指数等指标上,极为相近,五十年的研究成果,仅可有效地鉴别第1、第2和第9染色体。近年,一些学者开展甜菜中期染色体Giemsa分带,目的在于揭示并定位染色体的结构差异。但Giemsa分化染色,手续复杂,而且,更重要地,在甜菜核型分析上,并未取得理想的结果。 我们的方法与经典的Giemsa分化染色不同,取有丝分裂前期染色体,苏木精(Hema-     

甜菜染色体操纵材料遗传学特性及经济性状的研究

对甜菜染色体操纵材料即人工合成的远缘杂交甜菜及空中搭载实验材料进行了经济性状及遗传学育性特点的调查分析,比较白花甜菜染色体在不同实验材料中的绝对长度和相对长度。利用折光仪对抽检远缘杂交甜菜母根样本进行了含糖量单株检测。白花甜菜染色体的绝对长度和相对长度决定了远缘杂交后代的高频稳定传递特性。调查结果显示,远缘杂交甜菜6个实验样品的含糖量普遍高于栽培甜菜,染色体操纵结果是:成功将白花甜菜染色体上高糖、抗病、高频传递等有益基因导入栽培甜菜。白花甜菜染色体所携带的基因对远缘杂交甜菜遗传育种及野生甜菜基因利用方面都具有重要意义。     

甜菜BvM14-CCoAOMT基因的克隆、表达及生物信息学分析

以甜菜M14品系为试验材料,利用反转录PCR(RT-PCR)克隆获得了甜菜M14品系木质素合成相关基因咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因(BvM14-CCoAOMT)的c DNA全长。生物信息学分析结果表明,BvM14-CCoAOMT基因具有咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因家族的典型结构域;系统发育分析表明,BvM14-CCoAOMT基因与松叶菊(Mesembryanthemum crystallinum)CCoAOMT基因亲缘关系较近。荧光定量PCR结果表明,BvM14-CCoAOMT基因在甜菜M14品系的茎中表达量最高,盐胁迫下BvM14-CCoAOMT基因在甜菜M14品系茎和叶中均显著上调表达。亚细胞定位研究发现BvM14-CCoAOMT蛋白在细胞各个亚细胞部位均有分布。本研究为进一步深入研究BvM14-CCoAOMT基因的功能奠定了理论与材料基础。     

大鼠睾丸特异表达新基因Lrrc18的克隆及表达谱分析

运用数据库消减杂交(Digital Differential Display,DDD)分析方法,从大鼠睾丸组织中分离出了一个新基因-Lrrc18(GenBank登录号:BC081908).该基因定位于大鼠染色体16p16区带,gDNA在染色体上跨度40 900 bp,含6个外显子,编码一个含256个氨基酸的蛋白,带有4个LRR(leucine-rich repeat domain)结构域.Northern杂交结果显示Lrrc18只在睾丸中表达.对出生后3~56 d不同时期的大鼠睾丸的Lrrc18基因的表达进行检测,结果表明在大鼠出生后21 d时开始在睾丸组织中可检测到Lrrc18的mRNA表达,以后其表达量逐步上升,到42 d时达到最大值.该结果提示:Lrrc18基因在精子的发生过程中可能起重要作用.     

快速测定甜菜染色体倍数性的一种细胞学方法

<正> 甜菜多倍体新品种的选育,特别甜菜三体的选育过程中,准确测定甜菜细胞染色体数是一重要环节。因此,对准确而快速测定甜菜细胞染体倍数,一些作者从预处理上进行较多探讨。Rosen用冷冻和秋水仙素预处理四倍体甜菜。S。pM必oB等人用冷冻和8—羟基喹啉预处理甜菜胚根。李盛贤等人用冷冻和对二氯苯预处理甜菜胚根。白庆武等人对冷冻以及冷冻结合药剂预处理甜菜胚根,作了对比分橱研究。他们的研究对准确测定甜菜染色体倍数性具有重要的应用意义。然而,为达到快速而准确测定甜菜细胞染色体数和倍数性目的,除在显微镜下找到大量而清晰的细胞中期染色体图象之外,还需提高细胞染色体制片速度和质量。因此,我们对甜菜染色体数和倍数性的测定,从压片染色方法上作了一些改进,并达到了快速而准确测定甜菜染色体数和倍数性的良好效果。     

甜菜M14品系特异表达基因ESTs的生物信息学分析

甜菜M14品系具有无融合生殖特性,为了获得M14品系特异表达的基因,本实验室前期利用抑制消减杂交(SSH)和mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术对M14品系和能够进行有性生殖的栽培甜菜A2Y品系进行了基因特异表达研究,获得了298条M14品系特异表达基因的ES-Ts。对这些ESTs进行生物信息学分析并进行了GO分类,筛选出5条可能与基因表达调控和细胞周期调控相关的ESTs,为进一步获得这些基因的全长序列并研究其功能奠定了基础,也为今后能在甜菜M14品系中寻找并克隆与无融合生殖相关的基因提供了可靠的保证。     

植物原位杂交研究的进展

原位杂交是上世纪60年代建立起来的一种将特定基因或DNA序列直接定位到染色体上的技术.几十年来发展的非常迅速.已有基因组原位杂交(GISH)、多彩荧光原位杂交(FISH)、原位PCR(in situ PCR)、DNA纤维原位杂交(Fi-bre-FISH),应用于遗传学的各个领域,特别是用于外源DNA的鉴定.     

新型蛋白酶抑制剂基因hwtx-11在大肠杆菌中的克隆表达及杀虫功能研究

将化学合成的蜘蛛毒素蛋白酶抑制剂基因hwtx-11克隆至载体pGEX4T-1上,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.重组菌株在IPTG诱导下,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的GST-HWTX-11融合蛋白的相对分子量约为33 kD.对重组菌株诱导表达后的产物进行生物活性测定,GST-HWTX-11融合蛋白对甜菜夜蛾(Spodoptera exiguaHubner)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)在3d时的LC50分别为86.6μg/mL、119.4μg/mL;其与Cry1Ac对甜菜夜蛾和棉铃虫幼虫毒力也有明显的协同作用.     

带有白花甜菜染色体的栽培甜菜单体附加系RAPD分析适宜引物的筛选

运用68个10bp随机引物对白花甜菜、载培甜菜、带有白花甜菜染色体的栽培甜菜单体时扣系进行了PCR扩增,所选引物中有2个扩增产物不明显,44个引物扩增产物在所选材料中无多态性.22个引物的扩增产物对白花甜菜具有特异特殊异片段,这22个引物将可以用于白花甜菜单体对扣系的RAPD分析研究.