钩藤提取物与阿片受体结合特点分析

用放射配体结合实验方法确定钩藤提取物是否能与阿片受体发生相互作用,具体以3H-diprenorphine为标记配体,反应体系及反应条件同饱和结合实验,选用不同浓度的吗啡(10-10~10-5nmol/L)或钩藤提取物(0.125~4mg/mL)为竞争药物,考察钩藤提取物与转染阿片受体的结合水平.结果表明,钩藤提取物(0.125~4 mg/mL)浓度依赖地竞争3H-diprenorphine(1nmol/L)与μ、δ、κ3种阿片受体的结合,其IC50值分别为(1.27±0.86)mg/mL(n=3)(、0.59±0.21)mg/mL(n=4)和(1.20±0.24)mg/mL(n=3),其Ki值分别为(0.41±0.27)mg/mL(n=3)、(0.26±0.09)mg/mL(n=4)和(0.38±0.08)mg/mL(n=3),说明钩藤提取物非选择性地与μ、δ、κ三种阿片受体结合.     

间接酶联免疫法检测麻疯树核糖体失活蛋白

建立了基于单克隆抗体的间接非竞争酶联免疫法用于检测麻疯树核糖体失活蛋白的含量.优化单克隆抗体最佳工作浓度为312.5ng/mL,辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG最佳工作浓度为200ng/mL.该方法的线性范围为25~300ng/mL,线性回归方程为y=0.0024x+0.0322,相关系数R2=0.9985,定量检测限25ng/mL,定性检出限3.0336ng/mL.试验证明该方法准确度较高,且具有较好的重复性和特异性,可以用于实际检测麻疯树种仁核糖体失活蛋白的含量.     

重组工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA可溶性AiiA蛋白的发酵条件优化

通过对工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA的摇瓶发酵培养条件进行优化,确定了AiiA蛋白可溶性表达的最佳发酵培养基为牛肉膏蛋白胨.目的蛋白可溶性表达的最佳诱导条件为:IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导初始OD600为0.5,诱导时间为20 h,温度20℃,pH为7.0,微量元素Na2HPO420 mmol/L,250 mL三角瓶的装液量为70 mL.优化前可溶性AiiA蛋白的相对含量为2.23 mg/mL,占总目的蛋白的31.4%,优化后达到4.54 mg/mL,占总目的蛋白的60.3%,大大提高了目的蛋白的可溶性表达.     

伊班膦酸钠注射液含量及游离磷酸盐测定方法探讨

采用紫外分光光度法,显色后在828nm处测定伊班膦酸钠注射剂含量及游离磷酸盐.结果表明：伊班膦酸钠浓度在0.514 5～1.497 6 mg/mL范围内浓度与吸光度线性关系良好（R=0.999 6）.平均回收率为99.3%（n=9）,RSD=1.05%.游离磷酸盐浓度在0.116～5.83 g/mL范围内,浓度同吸光度...     

糖类对碱性成纤维细胞生长因子稳定性的影响

目的:研究糖类对bFGF(m)在溶液中的保护作用。方法:在相同浓度的bFGF(m)溶液中添加不同浓度的糖类,测定放置一定时间后的溶液中bFGF(m)可溶性浓度的差异和促细胞有丝分裂能力的变化。结果:在相同的条件下,添加蔗糖与海藻糖的bFGF(m)溶液随糖浓度增加,可溶性蛋白质量浓度和比活性增加。在蔗糖与海藻糖为0.8 mol时bFGF(m)可溶蛋白浓度和活性数值最高,所测得的蛋白质量浓度依次为(1.145±0.007 2)mg/mL、(1.125±0.005 6)mg/mL;所测活性数值依次为ED50=0.48 ng/mL、ED50=0.58 ng/mL;而添加葡萄糖、乳糖和麦芽糖的bFGF溶液,实验组中蛋白质量浓度和活性相对于对照组均未见有显著性提高。结论:海藻糖和蔗糖能够减少bFGF(m)聚集和沉淀程度,增加bFGF(m)在溶液中的溶解度,提高单位体积中的bFGF(m)活性单体量。     

睾酮可通过抑制StAR蛋白的表达调节自身的分泌

为了研究睾酮的自分泌调节机制,选取2-3周龄的仔猪睾丸间质细胞为研究材料。不同浓度的睾酮(0、10mg/mL、20mg/mL、50mg/mL、100mg/mL)与间质细胞共孵育48h,更换培养液,加入hCG(50U/mL)孵育4h,收集培养液,用放射免疫法(RIA)测定睾酮、hCG和cAMP的浓度。然后用浓度为50mg/mL的睾酮与胆固醇,5mg/mL;孕烯醇酮,500ng/mL;脱氢表雄酮,500ng/mL;雄烯二酮,500ng/mL和22R-羟胆固醇(3μg/mL)共同孵育间质细胞48h,更换培养液,加入hCG(50U/mL)孵育4h,收集培养液和细胞,用放射免疫法(RIA)测定睾酮,用免疫印迹测定StAR水平。实验结果如下:(1)随着睾酮浓度的增加,睾酮对自身合成的抑制作用逐渐增强,当睾酮浓度为50mg/mL,睾酮分泌、hCG的结合率以及间质细胞内cAMP的浓度分别下降了69.93%、61.24%和52.4%。(2)尽管睾酮抑制了胆固醇和雄烯二酮向睾酮的转化,但对其它几种前体物的转化没有明显影响。(3)睾酮不但抑制了基础水平StAR的表达,而且也抑制了hCG刺激的StAR蛋白的表达,这表明睾酮可以通过抑制StAR蛋白的表达降低自身的合成。     

苯酚-硫酸法测定太白泡沙参总多糖的含量

采用水提醇沉法制备太白泡沙参总多糖储备液.在优化条件(包括检测波长、试剂用量、反应温度)下,建立了苯酚-硫酸体系测定太白泡沙参总多糖含量的方法,并对该方法的精密度、重复性和加样回收率进行了考察.结果表明,对照液葡萄糖浓度为0.1 mg/mL时,1.0 mL的对照液所需5%苯酚的用量为1.0 mL,浓硫酸的用量为5.0 mL,反应温度为室温,在波长为490 nm处,回归方程Y=9.695X-0.009 2(r=0.999 8),葡萄糖的质量浓度在0.01～O.09 mg/mL线性关系良好.该方法的精密度RSD=0.66%(n=5),重复性RSD=0.29%(n=5),平均回收率为99.9%(n=9),RSD=2.1%.该方法简便、合理,适合太白泡沙参总多糖含量的测定.     

沙枣叶片愈伤组织诱导研究初报

以沙枣叶片作为外植体,以MS为基本培养基,用两种不同浓度激素的组合,筛选5组培养基进行继代愈伤组织及增殖诱导.结果表明,沙枣叶片诱导愈伤组织的最佳培养基为MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 1 mg/L kT1 mg/L 2,4-D 2 mL 25 g蔗糖 6 g琼脂(pH=5.5),诱导率达86.67%;以MS 6-BA 0.5 mg/L NAA0.5 mg/L kT1 mg/L 2,4-D 2 mL 25 g蔗糖 6 g琼脂(pH=5.5)作为愈伤组织增殖培养较理想.     

3种脱蛋白方法对虎斑乌贼肌肉多糖体外抗氧化活性的影响

【目的】比较3种不同脱蛋白方法对虎斑乌贼肌肉多糖体外抗氧化活性的影响。【方法】采用Sevag法、三氯乙酸法和等电点法对经过热水浸提的虎斑乌贼肌肉多糖进行脱蛋白,同时对脱蛋白多糖的体外抗氧化活性进行研究。【结果】3种不同脱蛋白方法得到的多糖均具有一定的抗氧化能力。当多糖浓度为5 mg/mL时,Sevag法、三氯乙酸法和等电点法得到的脱蛋白多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除率分别为87.05%、42.35%和38.54%,相应的IC50值分别为1.96mg/mL、11.81mg/mL和9.84mg/mL;对羟基自由基(·OH)清除率分别为93.67%、70.80%和68.75%,相应的IC50值分别为0.67mg/mL、1.37mg/mL和2.72mg/mL;对超氧阴离子(O-2)清除率分别为72.33%、62.42%和53.33%,相应的IC50值分别为0.15mg/mL、1.56mg/mL和3.81mg/mL。多糖还原力大小分别为0.183,0.160和0.144。【结论】3种脱蛋白方法所得虎斑乌贼肌肉多糖抗氧化活性大小依次为Sevag法三氯乙酸法等电点法。     

小球藻病毒PBCV-1编码的Cu,Zn-SOD酶学稳定性

将小球藻病毒模式株PBCV-1编码的Cu, Zn-SOD截短突变体tcvSOD克隆到大肠杆菌表达载体pET23a(+)后,经IPTG诱导在大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中表达得到了可溶性tcvSOD重组蛋白.该蛋白具有典型的SOD活性,能强烈抑制邻苯三酚的自氧化作用,最高抑制率为97%,反应体系中酶蛋白终质量浓度为0.2μg/mL时达到最大抑制,由此计算出其比活力为16 050 U/mg.tcvSOD的热稳定性和对蛋白变性剂SDS胁迫的反应与酶蛋白在反应体系中的质量浓度有关.终质量浓度为1μg/mL时tcvSOD可以耐90℃、30 min以及质量分数2%～10%的SDS处理而活性保持不变或略有丧失,终质量浓度为0.05和0.1μg/mL时则对上述处理非常敏感. 0.05、0.1、1μg/mL 3种质量浓度的tcvSOD对反应体系中pH4～12的变化,以及2～10 mol/L尿素和1～4 mol/L盐酸胍胁迫处理,酶活性保持恒定.实验结果表明tcvSOD具有较强热稳定性和pH稳定性,对常见蛋白变性剂也有良好抗性,有进一步开发利用的潜能.     

凝胶剂中脂溶性茶多酚的含量测定

目的:建立凝胶剂中脂溶性茶多酚的含量测定方法,为制定脂溶性茶多酚凝胶剂质量控制标准提供依据。方法:以无水乙醇为提取溶剂,酒石酸亚铁为显色剂,采用比色法,在540 nm处测定含量。结果:脂溶性茶多酚在0～250 mg.(100 mL)-1浓度范围内线性关系良好(R2=0.9991),平均回收率为102.80%,相对标准偏差为0.93%(n=9)。结论:本法简单、精确、重复性好,可用于凝胶剂中脂溶性茶多酚的含量测定。     

高效液相色谱法测定水果中常见的4种糖和糖醇

利用高效液相色谱法,一次进样,同时测定水果中的果糖、山梨醇、葡萄糖和蔗糖等可溶性糖的含量.结果表明,整个分析过程在27 min内完成,各组分能够达到很好的分离,在0.2~20 mg/mL的糖质量浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数在0.9999以上,4种糖的加标回收率为97.07%～100.11%,相对标准偏差小于5%.该方法具有较高的灵敏度与精密度,样品前处理方法简便,可用于快速、准确地测定水果中果糖、山梨醇、葡萄糖和蔗糖等可溶性糖的含量.     

高效液相色谱法测定鱼腥草不同部位中槲皮素的含量

建立一种快速、简便、准确测量鱼腥草中槲皮素含量的方法。5%盐酸乙醇提取鱼腥草中槲皮素,在流动相:乙腈-0.4%磷酸(v/v=45:55),流速:1.0mL/min,检测波长:370nm条件下高效液相色谱法(HPLC)进行检测。槲皮素线性范围为0.0012~0.12mg/mL,r=0.9997;平均回收率为91.93%,RSD=2.71%。本法操作简便、准确,重复性好,可用于槲皮素含量的测定。同时,对鱼腥草不同部位槲皮素含量进行测定,表明不同部位的鱼腥草中槲皮素含量差异很大,为评价其资源的开发利用提供依据。     

HPLC法测定阿尔维林硬胶囊的含量

建立了新的高效液相色谱法测定阿尔维林硬胶囊的含量。以0.01mol/L十二烷基磺酸钠-60%乙腈溶液为流动相(磷酸调节pH=3.0),流速1.5mL/min,紫外检测波长为220nm时,进样量20μL,使用ODS C18(200mm×4.6mm,5μm)为色谱柱对阿尔维林硬胶囊中阿尔维林与其它杂质实现基线分离。实验结果表明浓度在0.15～2.4mg/mL(r=0.999 1,n=5)范围内线性关系良好;平均回收率为:99.60%;最低检测限可达0.75ng;含量检测结果符合标准。本法精密度高,分离效果好,专属性与系统适用性强,可用于枸橼酸阿尔维林硬胶囊含量的测定。     

微波辅助萃取-高效液相色谱法测定苦丁茶中熊果酸的含量

采用微波辅助萃取—高效液相色谱法测定了苦丁茶中熊果酸的含量.苦丁茶粉碎后以乙醇为溶剂,微波高火提取4 min,采用高效液相色谱法（HPLC）测定熊果酸的含量.色谱柱为InertsilC18柱（5μm,4.6×150 mm）;流动相为甲醇/水（体积比90∶10）,流速为0.8mL/min,柱温40℃,检测波长为210nm.结果表明熊果酸在0.0996~0.4980mg/mL范围内线性关系良好,平均回收率为100.8%,RSD=1.12%,苦丁茶中熊果酸的含量为14.55 mg/g.     

高效毛细管电泳法测定缬沙坦苯磺酸氨氯地平

建立了一种高效毛细管电泳方法,用于缬沙坦和苯磺酸氨氯地平的同时分析:以30mmol/L磷酸钠缓冲液(pH=7.47)作为电解质溶液,检测波长237nm,分离电压15kV,高度差进样10s.同时进行了方法学验证:缬沙坦在0.050 4～0.504 0mg/mL内线性良好(r=0.999 8,n=6),迁移时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为0.3%和1.3%(n=6),回收率为98.98%～99.79%;苯磺酸氨氯地平在0.050 4～0.504 0mg/mL内线性良好(r=0.999 6,n=6),迁移时间和峰面积的RSD为0.6%和1.4%(n=6),回收率为98.22%～99.46%.通过上述高效毛细管电泳法,缬沙坦和苯磺酸氨氯地平在15.0min内分离良好,分离度(R=29.8).此方法快速,灵敏,实用.     

HPLC-ELSD法测定清开灵滴丸中胆酸和猪去氧胆酸的含量

建立了高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定清开灵滴丸中胆酸和猪去氧胆酸含量的方法.采用汉邦C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%甲酸-甲醇-乙腈溶液(25∶60∶15),柱温30℃,漂移管温度为105℃,空气流速2.2 L/min.胆酸和猪去氧胆酸的进样浓度分别在0.598¹.596 mg/mL(r=0.9992)和0.6001.596 mg/mL(r=0.9992)和0.600⁰.1.600 mg/mL(r=0.9995)范围内其线性关系良好,胆酸和猪去氧胆酸平均回收率分别为99.74%和99.21%.该方法准确,简便,分离度高,重现性好,可用于清开灵滴丸中胆酸和猪去氧胆酸含量的测定.     

微波法提取洋葱总黄酮工艺条件及含量测定

目的:探讨洋葱总黄酮提取工艺并建立洋葱提取物中黄酮类化合物含量测定方法,以充分开发利用洋葱资源.方法:微波辅助处理洋葱,乙醇-水浴提取类黄酮,采用正交试验优化提取工艺,分光光度法定量分析提取物中黄酮含量.结果:微波法提取洋葱黄酮优化工艺条件为料液比1∶15,微波辐射时间15 min,乙醇浓度70%,提取次数3次.方法学考察表明,标准品浓度在0.005 mg/mL~0.06 mg/mL范围内与吸光度有良好的线性关系(A=12.794C-0.0101,R2=0.9997),加样平均回收率为99.15%,经样品显色稳定性分析,最佳测定时间应选择在静置8~12 min时为宜.结论:为洋葱中类黄酮提取工艺的确定和含量测定提供科学依据.     

安乃近的普鲁士蓝分光光度法测定

基于安乃近能将Fe3+还原为Fe2+,Fe2+与铁氰化钾生成可溶性普鲁士蓝,建立了用可见分光光度法间接测定安乃近的新方法.对反应时间和反应温度进行了优化,安乃近浓度在0.06~7.20μg/mL范围内具有良好的线性关系,线性回归方程为A=0.0218+0.2394 C(μg/mL),相关系数R=0.999.摩尔吸光系数ε=8.4×104 L/(mol·cm).检测限(3σ/k)为0.024μg/mL.按照本法对市售安乃近片进行了测定,并进行了回收率实验,平均回收率为100.8%,结果令人满意.