奶牛胚胎简易快速冷冻及其移植试验研究

将7日龄的黑白花奶牛胚胎,采用简易冷冻仪,以液氮作冷冻源的快速冷冻、解冻法对胚胎进行冷冻.甘油作冷冻保护剂,以1℃/min的速度由室温降至-7℃,在-7℃下绣发结晶,并在-7℃下维持5分钟;又以0.3℃/min降到-10℃,最后以0.5℃/min速度降至-30℃,平衡10分钟后,胚胎直接投入液氮罐申保存。需移植时,直接在37℃温水中解冻。本试验解冻了25枚胚胎,取1,2级胚胎15枚,除去甘油后,将15枚胚胎用凯氏枪输卵器分别移植给15头同期受体的的母牛,现已产下3头牛犊.结果表明,采用简易冷冻仪、以液氮作冷冻源的快速冷冻、解冻的胚胎可以成活,且有利在生产实践中推广应用。     

小鼠胚胎一步冷冻法的探讨

超排处理81只昆明小白鼠、把出现阴道栓的42只小鼠进行冲卵,得到301枚胚胎。选用205枚晚期桑椹胚进行一步法冷冻至-196℃,经37℃水浴中解冻后,回收胚胎202枚,回收率为98.5％。将解冻后形态正常的175枚胚胎,经过处理,放置在37℃的CO_2培养箱中进行培养。同时,又用64枚新鲜胚胎(晚期桑椹胚)、一并放入培养箱中进行培养。经过24小时的培养,取出镜检,经过冷冻一解冻后培养的胚胎,发育的有54枚,新鲜胚胎发育的有35枚,48小时后再次镜检结果。发育到囊胚的解冻胚胎仅有10枚,占5.7％。新鲜胚胎发育到囊胚的为9.4％。通过本试验证明:小鼠的晚期桑椹胚,经过一步法冷冻至-196℃。再经解冻后进行培养。是能够获得进一步发育的。     

哺乳动物胚胎冷冻技术研究进展

报道了胚胎冷冻技术的发展及现状。根据它的发展分别介绍了慢冻慢解法、常规快速解冻法、玻璃化冷冻、1步细管法冷冻、1步冷冻和半胚冷冻，并且就胚胎冷冻保护剂、冷冻方法、解冷方法、冷冻保护剂的脱除及胚胎发育时期等对胚胎冷冻效果的影响进行了探讨。     

冷冻保存小鼠胚胎简易方法的研究

小鼠胚胎在冷冻保护剂二甲亚砜(DMSO)存在下,冷冻到-196℃,解冻以后可以存活。在无胚胎冷冻机的条件下,我们用简易冷冻装置,将不同胚龄的鼠胚放入其中,经缓慢降温后保存于液氮内。冷冻胚胎快速解冻后,胚胎回收率达67—79%。选择解冻后正常胚胎进行体外培养,48—72小时后能进一步发育为其存活标准,冷冻后胚胎存活率为66.07%。此方法简便易行便于推广。     

小鼠不同杂交组合胚胎玻璃化冷冻的研究

通过小鼠胚胎的毒性试验 ,确定对胚胎无毒性或毒性小的冷冻保护剂的种类、适宜浓度 ,以便达到提高冷冻解冻后的胚胎存活率的目的。用小鼠不同杂交组合胚胎进行玻璃化冷冻和解冻后 ,经体外培养观察胚胎的存活率和囊胚孵化率 ,确定了最佳的杂交组合     

小鼠胚胎冷冻方法的研究

本试验共用小鼠胚胎7858枚,对冷冻-解冻小鼠胚胎过程中的一些环节进行了对比试验,结果表明,冷冻过程中诱发结晶温度最好为-7℃左右,致冷时间以15—20秒为宜。致冷时间过长或过短都会引起解冻后胚胎成活率的下降。将胚胎缓慢冷冻至—0——40℃再投入液氮可获得较理想成功率。而—25℃以前投入液氮的胚胎其解冻后体外发育能力明显不如—30℃以后投入者。将胚胎冷冻管投入液氮的方式,对解冻后胚胎的形态和体外发育能力均有显著影响。将胚胎冷冻管插入液氮深部的效果显著优于漂浮于液氮表面者。添加甘油的方法对解冻后胚胎的体外发育能力无显著影响,三步添加甘油和一步添加甘油的胚胎,在解冻后培养的发育率和膨胀率方面均无显著差异。脱除甘油的方法明显影响解冻后胚胎的体外发育能力,在1/3M蔗糖液中分步脱除甘油的方法。明显优于在0.5M蔗糖液中一步脱除法。缓慢冷却至—36℃投入液氮的胚胎,在30～35℃水浴中解冻后体外培养成活率最高,而在0℃,10℃和20℃解冻的胚胎成活率明显降低。     

不同冷冻保护剂和冷冻方法冷冻小鼠4-细胞胚胎对其体外发育的影响

采用丙二醇(PROH)、乙烯乙二醇(EG)、二甲基亚砜(DMSO)和甘油(G)4种不同的冷冻保护剂,慢速冷冻、Vit-Master玻璃化冷冻两种冷冻方法冷冻小鼠4-细胞胚胎.发现采用慢速冷冻方法冷冻小鼠4-细胞胚胎时,以丙二醇为冷冻保护剂的胚胎成活率、囊胚形成率、囊胚孵出率显著高于以DMSO、G为冷冻保护剂的结果(P＜0.05),而以DMSO、G、EG为冷冻保护剂的结果间及以PROH、EG为冷冻保护剂的结果间没有显著性差异(P＞0.05).采用Vit-Master玻璃化冷冻方法冷冻小鼠4-细胞胚胎时,以EG为冷冻保护剂的胚胎成活率、囊胚形成率、囊胚孵出率显著高于以PROH、DMSO、G为冷冻保护剂的结果(P＜0.05),而以PROH、DMSO、G为冷冻保护剂的结果间没有显著性差异(P＞0.05).     

小鼠冷冻胚胎库

<正> 一引言 1972年Whittingham等人和Wilmut分别在超低温冷冻条件下冷冻保存小鼠胚胎获得成功。由于这项工作的理论意义和实用价值,国内外一些实验室相继开展了这项研究工作并相互交流各自的实验方法。出于对冷冻胚胎贮存的广泛兴趣 , 1974年9月荷兰肿瘤研究所的Otto Mhlbock博士在美国杰克逊实验室组织了一个专题讨论会。Mhlbock博士积极倡导运用冷冻胚胎技术保存小鼠遗传资源。与会代表对冷冻胚胎所涉及的各个方面,包括胚胎贮存期间电离辐射可能造成的危害及受体对冷冻胚胎恢复的     

生物技术在养羊业科学研究中的应用

介绍了冷冻精液、胚胎移植、胚胎冷冻、胚胎分割、体外受精、核移植克隆、基因导入等技术。这些技术的应用使养羊业育种和生产水平大为提高，产生了显著的经济效益。同时，为养羊业科研和生产开辟了新的途径。     

早期胚胎玻璃化冷冻保存技术研究进展

胚胎冷冻技术是胚胎移植真正走向商业化应用的关键环节,并受到广泛的关注,而玻璃化冷冻不仅具有操作时缩短、而且方法简易、不需要昂贵的设备,容易在生产中推广使用,因而日益受到人们的重视。本综述阐明了胚胎玻璃化冷冻原理,讨论了抗冻保护剂及其选择原则,比较了玻璃化冷冻技术各种方法及其优缺点,分析胚胎玻璃化冷冻的影响因素,展望了玻璃化冷冻技术的应用前景。     

小鼠胚胎冷冻技术的研究进展

传统胚胎冷冻技术如OPS、冷冻环、冷冻帽、冷冻膜等,在胚胎复苏率和囊胚形成率、技术可行性、温度适用范围、冰冻和解冻速率等方面各具有其特定优缺点,在实际推广和应用中存在一定局限性。本文就新型微滴式玻璃化(Modified droplet vitrification,MDV)胚胎冷冻技术和高重量渗透摩尔浓度玻璃化(High osmolality vitrification,HOV)两种新型胚胎冷冻保存技术进行概述,并阐明胚胎冷冻保存及复苏发育过程中所受温度、饮食中植物雌激素、N-乙酰半胱苷酸等参数的影响。     

小鼠胚胎一步冷冻法

本文描述了冷冻小鼠胚胎直接投入液氮的简单一步法。这项研究的主要目的是评价小鼠胚胎在下列不同浓度的甘油和蔗糖混合液中预脱水后冷冻胚胎解冻后的活力。同时研究了脱水前甘油的预处理及胚胎阶段的不同效果。当蔗糖浓度保持恒定(0.25M),甘油浓度变化范围为1.0～4.0M时,以甘油浓度2.0M冷冻胚胎解冻后活力最高(67％)。采用甘油预处理并不优于不预处理。当甘油浓度保持恒定(2.0M)。蔗糖浓度变化范围为0—1.0M时,发现在0.5M蔗糖中冷冻胚胎解冻后活力最佳(81％)。桑椹胚存活率优于囊胚(86％),VS72％)。与鲜胚移植54％的出生率相比较。胚胎冷冻最佳处理(2.0M甘油+0.5M蔗糖)解冻后移植出生率为41％。这项技术可实际应用于家畜胚胎的冷冻与解冻。     

生殖细胞及胚胎冻存技术发展及展望

生殖细胞及胚胎冷冻保存是生物种质资源保护及开发的重要技术,为人类自身健康医学发展、遗传育种、养殖生产和生物资源保护等提供重要支持。研究认为,针对不同物种及不同类型生殖细胞及胚胎的特点,冷冻保存技术具有较大差异。目前,生殖细胞及胚胎冷冻保存技术主要分为慢速冷冻和快速冷冻,对冷冻对象均具有较大程度损伤。而不同冷冻保护剂的运用可有效降低不同冷冻技术应用时对生殖细胞及胚胎的损伤作用。查找和优化冷冻方法类型及冷冻剂配方,是针对研究对象建立适合的冷冻技术的关键。本文以现有研究为依据,对动物精子、卵母细胞和胚胎的冻存方法进行梳理并展开综述,以期为相关研究及技术人员提供参考。     

浅议如何提高奶牛配种受胎率

奶牛繁殖配种是养奶牛的关键，加强配种前后的饲养管理；选择好配种季节，选好优质冷冻精液采用合理解冻技术；及时掌握奶牛发情期等都是提高受胎率的关键环节。     

利用妊娠奶牛血液快速鉴定不同发育阶段的胚胎性别

采集妊娠奶牛静脉血液，从血浆中提取胎儿DNA，利用牛Y染色体上性别决定基因（sex-determining region Ylinked gene, SRY gene）的特异性序列设计引物，应用巢式PCR扩增SRY基因特异性片段，同时以牛肌动蛋白（β-Actin）特异性片段的扩增产物作为内参照，对32头妊娠奶牛早期胚胎性别进行鉴定。结果表明：从不同妊娠期奶牛血浆中提取胎儿游离DNA进行胚胎性别鉴定的总准确率为80％，其中1～2月龄、2～3月龄、4～8月龄胚胎性别鉴定的准确率分别为60％、85．7％、92．3％。     

小鼠胚胎快速冷冻方法的研究

3770枚小鼠胚胎随机分为以下12个试验组:三个不同浓度甘油(2.1、2.8和3.5M)分别与四个浓度蔗糖(0.25、O.5、0.75和1.00)配合成12种不同高渗快速冷冻液。通过对比筛选试验,对昆明小鼠的紧缩致密期早囊胚快速冻存试验.确定3.5M甘油和0.25M蔗糖混合成的快速冷冻液为最佳组合,用其处理的胚胎,经快速冷冻、解冻后。胚胎体外培养发育率最高,达84.3％,其中膨胀期和孵化期胚胎为78.3％,明显高于其它11种组合(P<0.01)。     

山羊胚胎的体外发育及冷冻保存研究

采用体外培养的方法，对山羊２～８细胞胚进行培养以后将体外发育至囊胚的胚胎进行冷冻保存，以便探讨山羊早期胚的体外培养方法和冷冻方法对体外发育胚冷冻效果的影响。将胚胎分别放入Ｍ１９９、Ｍ１９９＋输卵管上皮细胞和Ｍ１９９＋输卵管上皮细胞＋ＥＧＦ的培养液中进行培养，选取发育至囊胚期的胚胎分别以甘油和乙二醇为冷冻保护剂进行冷冻保存。结果体外培养胚的囊胚发育率在三个处理组中分别为１２．５％、７０．６％和７６．９％。使用Ｍ１９９处理组与添加输卵管上皮细胞、添加输卵管上皮细胞和ＥＧＦ的处理组之间具有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。冷冻解冻胚的形态正常率和发育率在以甘油和乙二醇为防冻剂的处理组中分别为６８．７、５８．３％和７８．６％、７２．８％。两组之间无明显差异，结果表明，采用与输卵管上皮细胞共同培养的方法能够提高山羊胚胎体外培养的发育率，以甘油和乙二醇为冷冻防冻剂均适合于山羊体外发育胚的冷冻保存，两者相比乙二醇的效果略优于甘油。     

二乙酰荧光素评估小鼠玻璃化冷冻胚胎活力试验

在形态学鉴定基础上，用二乙酰荧光素（ＦＤＡ）评估小鼠玻璃化冷冻胚胎的活力，并摒弃受损伤严重的胚胎，将活力较强的胚胎移植给受体，采用此法能得到较好的冻胚移植体内发育率，与鲜胚移植相比较无显著差异，冻胚解冻后只需２分钟便可鉴定出胚胎活力。     

绒山羊胚胎的体外培养,冷冻保存和移植的研究

采用体外培养和冷冻保存的方法将起排处理后的绒山羊２～８细胞期胚胎经体外在Ｍ１９９＋ＦＣＳ（对照组）、Ｍ１９９＋ＯＥＣ＋ＦＣＳ、Ｍ１９９＋ＯＥＣ＋ＥＮＧＳ和，Ｍ１９９＋ＯＥＣ＋ＮＳＳ的培养基中分别进行培养以后，选取发育为桑椹胚和早期囊胚期胚胎分别以１０％Ｇｌｙ、１０％ＥＧ为防冻剂和玻璃化方法进行冷冻保存，并将用常规和玻璃化法冷冻保存的胚胎解冻后进行移植．结果表明，体外培养胚胎的囊胚的发育率在四个培养处理组中分别为１２．５％、７０．６％、８１．８％和７３．９％，对照组与添加ＯＥＣ处理组之间具有极显著性差异（Ｐ＜０．０１），囊胚发育率在添加ＦＣＳ、ＥＮＧＳ和ＮＳＳ的实验组之间无明显差异．经冷冻保存的桑椹胚和早期囊胚的冷冻解冻胚的形态正常率在甘油、乙二醇和玻璃化三个冷冻处理组中分别为７５．０％、８６．７％和７５．０％，发育率分别为５８．３％、７８．８％和８０．０％．冷冻解冻胚的移植妊娠率在三个处理组中分别为５０％、７５％和５０％，产羔率分别为３０％、６８．８％和５０％．采用乙二醇冷冻绒山羊胚胎产生的效果优于甘油和玻璃化方法的冷冻效果。     

冷冻生命的奥秘

科学家已经做到了能够用冷冻保存的人体精子给卵子受精,还可以把胚胎冷冻保存起来,日后移植到人体子宫内,但是冷冻未受精的卵子的技术相对复杂得多,然而经过科学家几年的努力,最近终于取得了成功,从而使生命的冷冻成为完全的可能。 冷冻卵子技术为什么相对复杂,这得从卵子的细胞结构谈起。当科学家冷冻细胞或人体胚胎的时候,通常要用专门的化学物质取代