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应用抑制差减杂交法分离水稻幼穗发育早期特异表达的基因 总被引:16,自引:0,他引:16
以水稻茎尖分生组织为对照群体,幼穗分生组织为目标群体,进行抑制差减杂交。用经过SAM cDNA差减的Pb/Sb cDNA群体构建了一个差减文库,通过差示筛选鉴定了40个在Pb/Sb中特异表达或表达增强的候选克隆,Northern杂交验证,至少40%的候选克隆代表了在Pb/Sb中特异表达或表达增强的基因,同时,相当一部分克隆为你荐度转录本。对40个cDNA克隆单向测序后,与GenBank中同源序列进 相似文献
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利用土壤农杆菌将天花粉蛋白基因转入水稻植株并检测抗稻瘟病活性 总被引:9,自引:1,他引:8
通过土壤农杆菌方法将天花粉蛋白基因转化到水稻中,获得了具有单拷贝外源基因插入和表达的水稻再生植株,抗稻瘟病(Pyricularia oryzae)检测发现,接病菌后1个月内转天花粉蛋白基因植株在发病时间、发病植株数、发病叶片、发病后的植株生长状况等各项指标上与对照的转GUS基因植株比较均有较大差异。在去除高温湿度的发病环境后,转天花粉蛋白基因植株的生长情况也明显优于对照植株,表明转基因水稻对稻温病 相似文献
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利用安全性转基因技术导入反义蜡质基因降低稻米直链淀粉含量 总被引:5,自引:0,他引:5
利用安全性转基因技术中的共转化法, 将分别含有p13W4双元载体(含有潮霉素抗性基因、gus报告基因以及反义蜡质基因片段)和p13W8双元载体(无潮霉素抗性基因和gus报告基因, 只含有反义蜡质基因片段)的根癌农杆菌以1:9的比例混合导入超2-10高产水稻新品系中, 获得34棵转基因植株. PCR分析转基因T0代植株, 结果显示, 有15株是共转化植株, 共转化率为44.1%. 利用p13W4双元载体上的gus报告基因从T1代种子中淘汰具有报告基因及抗性标记基因的转基因后代, 再利用PCR检测从T1代植株中获得只有反义蜡质基因的植株. Southern blot杂交分析证实, p13W8双元载体T-DNA已整合进入无抗性标记及报告基因的转基因后代基因组中. T2代成熟种子直链淀粉含量分析显示, 转基因植株糙米直链淀粉含量比对照有不同程度的下降, 幅度最大的比对照降低28.61%. 由于获得的转基因后代只有目的基因而无抗性选择标记基因和报告基因, 而且水稻中的稻米直链淀粉含量已降低, 它们既可被用于筛选软米材料, 也可视为是能够用于其他水稻稻米食味品质改良的水稻新资源. 相似文献
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反义Wx基因导入我国籼型杂交稻重点亲本 总被引:32,自引:1,他引:32
为改良我国籼型杂交稻稻米的食用品质,利用基因工程技术经农杆菌介导将反义蜡质基因导入保持系龙特甫B等3个高直链淀粉含量的籼型杂交稻重点亲本中,经潮霉素抗性筛选获得了较多的抗性植株。PCR和Southern杂交检测证明,反义Wx基因已整合进转基因水稻的基因组中,绝大多数转基因水稻植株的表型正常。成熟种子直链淀粉含量分析表明,部分转基因水稻T1和T2代种子中的直链淀粉含量已有不同程度的下降,最低的已下降至7%左右,与未转化对照相比下降了18.39%。此外直链淀粉含量改变后对稻米的胶稠度和湖化温度也有一定的影响。 相似文献
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转导GST-pi基因表达抑制甲基丙烯酸环氧丙酯的致癌作用 总被引:2,自引:0,他引:2
环境中的化学致癌物是引发癌症的主要原因,谷胱甘肽S-转移酶(GST)pi在防止各种内、外源的对细胞的损害方面起关键性作用,GST-pi基因与反转录病毒载体(pXT1)重组后转染3T3细胞,使该基因在3T3细胞中整合和表达,研究发现:GST-pi的表达可以防止化学致癌物甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导的细胞恶性转化,此结果为进一步探讨GST-pi在癌症预防领域的作用提供了科学依据。 相似文献
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血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应 总被引:1,自引:0,他引:1
PF4的C-末端13肽和TSP1的429~459片段31肽通过Gly-Pro-Gly肽桥设计为融合蛋白TSF.采用pGEX-2T载体在 E.coliJM109中获得了 TSF蛋白的高效表达.采用 MTT方法、损伤细胞迁移实验。鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验,测定了TSF及其相关物GST-TSF,PF4(58-70),TSP1(429~459)等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应.结果显示TSF特异抑制小牛主动脉血管内皮细胞的生长,并有明显的剂量依赖关系;非常显著抑制血管内皮细胞的运动迁移;显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管生成;上述抑制活性TSF>>GST-TSF>PF4(58~70)>TSP1(429~459).TSF显著抑制小鼠Lewis肺癌的生长,1.0μmol/kg·d的TSF对Lewis肺癌的抑瘤率达到68.75%.结果说明TSF的重组设计是成功的,TSF为一个人工重组的有效的血管生成抑制因子. 相似文献
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玉米的叶片坏死斑点(lethal leaf-spot 1,Lls1)基因及其拟南芥中的同功能基因已证明编码叶绿素分解代谢中的关键酶脱镁叶绿酸氧化酶(pheide a oxygenase,PaO).为了深入研究大豆叶片衰老过程中叶绿素分解代谢的调控机制,从大豆中克隆了玉米Lls1的同源基因,其cDNA全长1817bp,命名为GmLls1(GenBank登录号:DQ154009).序列分析表明,该基因与拟南芥、玉米、豇豆和番茄等的Lls1及其同功能基因具有很高的同源性,其编码蛋白含有典型的Rieske[2Fe-2S]结构域、非亚铁血红素铁结合域和C-末端CXXC基序,这些都是PaO功能蛋白所具有的典型结构特征.RT-PCR结果显示,在大豆叶片自然衰老、人工黑暗诱导衰老和子叶衰老3个系统中,GmLls1基因都表现出明显的衰老上调趋势.进一步分析发现,在因敲减类受体蛋白激酶rlpk2基因而导致衰老延缓的大豆转基因叶片中,GmLls1的表达显著下降,而在因过表达rlpk2而导致加速衰老的转基因叶片中,GmLls1的转录本积累明显增加,暗示RLPK2介导的信号途径可能参与调控GmLls1在大豆叶片衰老过程中的表达,而rlpk2-RNAi转基因离体叶片光照下表现出lls1突变体典型的斑状失绿坏死表型则进一步支持了上述推论. 相似文献
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两种植物病毒编码蛋白的基因沉默抑制子功能鉴定 总被引:12,自引:0,他引:12
采用农杆菌浸润方法以及重组的马铃薯X病毒(PVX)表达载体, 研究了甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)编码的P14蛋白和水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)编码的S6蛋白对植物基因沉默的抑制作用. 绿色荧光蛋白(GFP)表型观察及核酸杂交结果表明, 这2种病毒基因均能够强烈抑制转基因本生烟(16C)中由同源序列引起的gfp基因沉默, gfp基因mRNA的含量明显高于未发生沉默抑制的对照植株, 并导致PVX感染后的寄主症状加重, 说明它们可能是由病毒编码的RNA沉默抑制因子. 其中, RBSDV S6基因对植株体内基因组DNA甲基化过程的抑制作用更为强烈. 相似文献
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人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对DNA结合蛋白的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
用凝胶迁移改变实验研究了人δ珠蛋白基因启动子区-64C→T点突变对DNA结合蛋白的影响,人工合成两条36bp该基因启动子区-83--48bp之间的片段WOG和MOG,WOG含有野生型“CAAT样盒”以及,MOG含有变异型“CAAT样盒”。结果表明:(1)在红系细胞MEL,k562以及经Hemin诱导的k562细胞中,MG对CCAAT结合蛋白和GATA-1的要和力显著增加;(2)经Hemin诱导的k 相似文献
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兔防御素NP-1基因在转基因烟草中的表达及其对烟草青枯病的抗性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
从兔子肝脏细胞中扩增到防御素NP_1成熟肽的编码序列 ,长约 2 0 0bp .将此片段插入到切除了GUS编码序列的pBI1 2 1质粒载体中 ,构建成植物表达载体 pBIC_35SNP1 .通过根癌农杆菌介导的叶盘法 ,将pBIC_35SNP1导入烟草细胞中 ,并获得了经Southern杂交证实的转基因植株 .进一步的Northern杂交证明防御素NP_1基因能够在转基因植株中正常转录 .抗菌实验表明转基因植株增强了对烟草青枯病的抗性并延缓了烟草青枯病的发病 相似文献
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通过cDNA阵列技术鉴定拟南芥生长素应答基因 总被引:3,自引:0,他引:3
生长系作为一种重要的植物激素具有广泛的生理作用,但其作用的分子机理还有待深入研究,为系统地鉴定生长素应答基因,采用cDNA阵列技术检测以拟芥悬浮细胞系经IAA处理前后基因表达的变化,从13824个cDNA中克隆中筛选到50个差异表达克隆,这些生长素应答基因分别与信号转导、逆境反应、衰老、光合作用、蛋白质合成与转运等功能相关,从分子生物学角度证明了生长素的广泛作用,为研究其作用机制提供了线索,另外,初步鉴定了一个受外源生长素抑制的叶绿体蛋白酶调节亚基ClpC基因的功能,证明该基因在衰老叶片中被诱导,是一个衰老相关基因。 相似文献
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表达cryIA/gna双价抗虫基因烟草兼抗棉铃虫和蚜虫 总被引:16,自引:0,他引:16
利用人工合成的、密码子优化后的雪花莲凝集素(GNA)基因,与人工合成的CFM cryIA构建了双价抗虫基因植物高效表达载体。通过根癌农杆菌介导转化烟草,获得28株卡那酶素抗性植株,经PCR及Southern印迹检测,证实了双价抗虫基因在烟草基因组中的整合,转基因烟草杀棉铃虫试验表明,40%转基因烟草植株对棉铃虫具有高抗性;Bt杀虫蛋白ELISA检测获得与虫试较一致结果,抗虫性较强株K11号CryI 相似文献