细叶结缕草克隆植株生长发育时间节律初探

通过对克隆植物细叶结缕草（Zoysia tenuifolia Willd．）匍匐茎上复合节及各器官形态建成的时间观测，探讨其克隆植株生长发育的时间节律．研究表明：细叶结缕草的生长发育呈现出较强的节律性，主匍匐茎和二级匍匐茎的生长具有一定相似性．在主匍匐茎和二级匍匐茎上，一般3．3d左右形成一个复合节，而单个复合节间的发育一般需要持续7～8d时间．复合节间的30％的增长是在另外一个复合节形成并快速伸长的同时进行的．通过主匍匐茎的向前直线型生长和次级匍匐茎的侧向伸展，细叶结缕草分株种群规模扩大，提高了生态适应性和种间竞争能力．     

克隆植物结缕草在两种环境中的生长发育特征

以克隆植物结缕草为对象,研究了其在温室内、外两种环境条件下的生长发育特征.结果表明：在相同环境条件下,主匍匐茎上的复合节、根、Ta和Tb分蘖的形成顺序依次后移,且形成速率均呈相互平行的直线关系.但在温室内,主匍匐茎上的复合节及其它器官的形成时间一般均较温室外晚.复合节间的形成是逐渐完成的,在温室外,一个复合节间的70%完成于该复合节形成后和下一个复合节间形成前,而其余则完成于下一个复合节间形成之后.在温室外,二级匍匐茎上复合节及其它器官的形成规律与主匍匐茎相似,但Tb的形成速率较慢.这与各级匍匐茎之间以及各相应构件器官之间资源传输与分配格局存在差异有关.通过主匍匐茎的向前直线型生长和次级匍匐茎的侧向伸展,结缕草分株被放置到更加广阔的生态空间,分株种群规模扩大,资源摄取能力增强,从而有助于提高结缕草的生态适应性和种间竞争能力.     

密度对结缕草无性系构件生长的影响

以克隆植物结缕草为研究对象,在试验园内设置了低、中、高3个密度梯度,在生长季末调查了不同密度下结缕草无性系构件匍匐茎和分蘖的相关指标。结果表明,随着密度的降低,结缕草单株产生的匍匐茎数量增加、匍匐茎分枝结构变得复杂,匍匐茎总长度、节间长度和节数增加;低密度下分蘖数量明显增多,分别达到高密度、中密度处理的19倍和3倍。因此,结缕草无性系构件在不同密度下采取了不同的适应对策,低密度下迅速占领空间,高密度下则减缓生长,以降低种内构件间的竞争。     

结缕草的组织培养

以辽宁产结缕草种胚为材料 ,在MS +10 0mg/L肌醇 +0 4mg/LVB1+1 0mg/L 2 ,4 D +30g/L蔗糖 +0 8%琼脂培养基上暗培养 ,产生愈伤组织 ,诱导率为 85 % .愈伤组织经多次继代培养后可保持分化潜力 .光照培养后分化出丛生状叶片 ,并在培养基MS +10 0mg/L肌醇 +0 4mg/LVB1+30g/L蔗糖 +0 8%琼脂上大量生根 ,形成再生植株 ,再生率为 80 % .平均每个种胚可产生 2 0～ 30个小植株 ,再生周期为 80d左右 .     

结缕草的组织培养

以辽宁产结缕草种胚为材料，在MS＋100mg／L肌醇＋0．4mg／L VB1 1．0mg／L 2，4—D＋30g／L蔗糖＋0．8％琼脂培养基上暗培养，产生愈伤组织，诱导率为85％．愈伤组织经多次继代培养后可保持分化潜力．光照培养后分化出丛生状叶片，并在培养基MS＋100mg／L肌醇＋0．4mg／L VB1＋30g／L蔗糖＋0．8％琼脂上大量生根，形成再生植株，再生率为80％．平均每个种胚可产生20—30个小植株，再生周期为80d左右。     

不同处理技术对结缕草返青时间的影响

研究结果表明：刈剪和火烧分别使结缕草草坪提前返青３９天和２１天。     

重庆文理学院结缕草草坪主要杂草的调查

在春秋两个季节对重庆文理学院结缕草属草坪中的杂草进行调查,以确定结缕草草坪中常见杂草的种类及其发生规律．结果表明,常见的草坪杂草隶属25科48种,其中,香附子（Cyperusrotundus）、狗牙根（Cynodondactylon）、空心莲子草（Alternantheraphiloxcroides）、马唐（Digitariasanguianlis）、酢浆草（Oxaliscorniculata）、积雪草（Centellaasiatica）等最为常见,同时也是草坪杂草中的优势种．     

关于结缕草草坪秋季覆膜的对比研究

本文通过对覆膜与未覆膜的晚播结缕草草坏主要生长指标的对比测定,得出结论：对晚播的结缕草草坪进行秋季覆膜,可延长其生长期有绿期,提高幼苗成活率,并保证结缕草幼苗安全越冬。     

重庆文理学院结缕草草坪主要杂草的调查

在春秋两个季节对重庆文理学院结缕草属草坪中的杂草进行调查,以确定结缕草草坪中常见杂草的种类及其发生规律．结果表明,常见的草坪杂草隶属25科48种,其中,香附子（Cyperusrotundus）、狗牙根（Cynodondactylon）、空心莲子草（Alternantheraphiloxcroides）、马唐（Digitariasanguianlis）、酢浆草（Oxaliscorniculata）、积雪草（Centellaasiatica）等最为常见,同时也是草坪杂草中的优势种．     

草鱼生长激素基因的克隆及原核表达研究

应用RT-PCR技术从草鱼脑垂体总RNA中克隆草鱼生长激素cDNA(cGH),全长669bp,含开放阅读框633bp,编码210个氨基酸,分子量为23．6kDa,等电点为6．28;与已报道的草鱼GH有12个碱基、3个氨基酸残基的差异,同源性为98％．将草鱼cDNA定向插入原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组草鱼GH基因质粒pGEX-GcGH,经IPTG诱导,pGEX-GcGH在大肠杆菌中可表达49．6kDa的融合蛋白．     

角化细胞生长因子的获得及植物表达载体的构建

从鼠肺中提取RNA,设计相应的引物,经RT PCR扩增出角化细胞生长因子cDNA序列;插入pMD18 T载体,经DNA测序证实为KGF基因.将KGF基因经酶切后连接于植物CaMV35S启动子和NOS终止子之间,单酶切插入pBI1301植物双元表达载体,转化大肠杆菌,阳性克隆提取质粒后转化农杆菌EHA105,实现KGF植物表达载体的构建,为KGF的进一步研究奠定基础.     

真菌纤维二糖水解酶基因的克隆与表达研究

采用能够转化细菌和真菌的双功能质粒ｐＤＬ１，与部分酶切的糙皮侧耳（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｏｓｔｒｅａｔｕｓ）基因组ＤＮＡ片段进行体外重组。再用重组质粒ＤＮＡ转化玉米黑粉菌（Ｕｓｔｉｌａｇｏ，ｍａｙｄｉｓ）的原生质体，在平皿上筛选抗新霉素的转化子，转化率达８００转化子／μｇＤＮＡ，由此在玉米黑粉菌中建立了糙皮侧耳的基因文库。随机选出１５个转化子提取其ＤＮＡ，以３２Ｐ标记的ｎｅｕｒ基因酶切片段作为探针进行打点杂交，全部显示阳性，证明抗性菌落不是来源于敏感细胞的回复突变。以李氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ）的纤维二糖水解酶（Ｃｅｌｌｏｂｉｏｈｙｄｒａｓｅｓ，简称ＣＢＨ）ＣＢＨⅡ基因末端片段为探针，从阳性克隆菌株中提取ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转移并杂交，结果证明本研究已成功地克隆了糙皮侧耳纤维二糖水解酶ＣＢＨⅡ基因。基因的表达检测证明，克隆菌株具有纤维二糖水解酶活力。     

植物生长调节剂对高羊茅生长的影响

以草坪草高羊茅为试材,研究了不同浓度植物生长调节剂对其生长的影响.结果表明,多效唑、矮壮素和脱落酸对降低高羊茅植株高度、抑制叶片生长发育和地上部分生物量有较明显的作用,对分蘖和根的生长发育有促进作用.其中以多效唑效果最为显著.     

朝鲜崖柏生境及高生长规律分析

采用标准地调查法测定朝鲜崖柏的土壤特征、林下植被和高生长规律.结果表明:朝鲜崖柏生长于土层较薄且呈弱酸性的山地暗棕壤,不同标准地林下植被差异明显;不同标准地朝鲜崖柏树高的年生长量均呈逐年下降趋势.     

中国四个小型猪品种生长激素基因克隆测序及分子进化研究

研究对中国四个小型猪五指山猪、贵州香猪、滇南小耳猪和藏猪的生长激素基因(pGH,porcine growth hormone)进行了克隆测序及构建分子进化树,考察该激素对小型猪体型的影响。通过筛选合适的引物,采用PCR技术,扩增了四个小型猪品种的pGH基因全序列,并对其进行了克隆测序分析。4个小型猪品种pGH基因全长为2006bp,包括5个外显子和4个内含子,CDS全长为648bp。将4个品种小型猪和长白猪、雅南猪、内江猪进行了核苷酸序列比对,共有63处发生了变异,变异率为2.9%,其中外显子有12处变异,全部为转换;内含子有51处发生了变异,包括转换、颠换和缺失。聚类结果基本符合其地方猪种的地理位置分布原则。     

半套式PCR技术在植物基因克隆中的应用

常规ＰＣＲ方法在分离克隆已知序列的基因中发挥着重要的作用,但要求目的基因片段与引物间的同源性几乎是１００％,一旦引物序列与目的基因间存在有差异,便往往会导致扩增的特异性不强,扩增效率不高,给克隆带来很大的困难．在常规ＰＣＲ基础上,若所分离的基因在不同植物间存在保守序列,依据这一序列再合成一对引物,进行半套式ＰＣＲ则能大大提高扩增的特异性及扩增效率．对于较长的基因片段而言还能同时完成亚克隆．本文依据南瓜ＧＰＡＴ（甘油－３－磷酸酰基转移酶）基因ｃＤＮＡ序列及比较拟南芥菜、豌豆间在该基因内的保守区段序列合成相应引物来分离克隆黑子南瓜及西瓜ＧＰＡＴ基因的ｃＤＮＡ片段为例来说明半套式ＰＣＲ技术在植物基因克隆中的应用     

人碱性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌中的融合表达

将人碱性成纤维细胞生长因子ｈｂＦＧＦ基因克隆于质粒ｐＧＥＸ，构建了融合蛋白ＧＳＴ－ＦＧＦ的表达质粒ｐＧＥＸ－ＦＧＦ，将ｐＧＥＸ－ＦＧＦ转化大肠杆菌ＤＨ５α，诱导培养后测得融合蛋白表达量占菌体总蛋白量的２２％，每升发酵液中可产生１８８ｍｇ ＧＳＴ－ＦＧＦ。